第十一 章节 植物、动物基因工程.pptVIP

第十一章:动植物基因工程 植物基因工程 动物基因工程 一、植物基因工程 依据植物细胞全能性 对单个细胞改造即可再生完整的转基因植株 转基因植物可以遗传 （一）植物基因转化的方法 1、农杆菌的Ti质粒载体 农杆菌是植物病原菌 携带Ti质粒 质粒上一段DNA称为T-DNA（Transfer-DNA) 能转移并整合到植物基因组中 2、基因枪 目的基因用金粉或钨粉包裹成直径1~4μm颗粒，再利用基因枪以火药爆炸或压缩氦气为动力将DNA颗粒以300~600m/s的速度打入植物细胞。 （二）植物抗病的分子机理 1、植物的抗病反应 非寄主抗性：病菌只对某种植物有作用—轮作 结构屏障：细胞壁、角质层、蜡质、木质化 诱导抗性：产生防卫反应，糖蛋白、抗毒素等 2、抗病基因的克隆 目前已克隆了16个抗病基因如： 玉米的HmI基因：对Cochliobolus真菌的抗性 番茄Pto基因:对avrpot病菌的抗性 拟南荠Rps2基因：对avrRpt2病菌抗性等。 3、杀菌肽 能够起到杀菌作用的多肽 许多昆虫中具有这样的多肽 能够破坏细菌的细胞膜，造成离子通道，导致细胞内含物泄漏。 杀菌肽的特点 由30多个aa组成 N端由碱性aa残基组成 C端酰胺化 多数第二位为Trp 对植物病原菌有强的和广谱的杀伤作用 杀菌肽基因工程 人工合成杀菌肽基因 转入植物体中 获得抗性品种 （三）抗性品种的培育 1、抗虫植物 苏云金杆菌毒蛋白（Bt toxin）基因 苏云金杆菌孢子能产生伴孢晶体蛋白，也称为杀虫晶体蛋白或Bt毒蛋白。通过人工改造合成的Bt毒蛋白基因，对棉铃虫等有强的毒杀作用。 苏云金杆菌毒蛋白（Bt toxin）基因 图 蛋白酶抑制剂基因 产生的蛋白酶抑制剂，能抑制昆虫的消化酶，抑制植物蛋白的水解，使昆虫产生厌食反应，最终导致昆虫的死亡。 外援凝聚素基因 产生的外源凝集素被昆虫摄食，可与肠道粘膜上的糖蛋白结合，影响营养物质的吸收，还可以诱发消化道病灶对昆虫造成危害，达到杀虫的目的。 2、抗病毒植物 病毒侵染植物的主要过程 脱外壳蛋白 病毒蛋白的翻译 病毒基因组的复制 病毒颗粒的包装 外壳蛋白介导的抗性 转入外壳蛋白基因，产生的外壳蛋白可以封闭病毒侵染植物的脱壳过程，使病毒核酸无法进入植物。 反义RNA介导的抗性 将互补的病毒外壳蛋白mRNA的anRNA转入植物，可阻碍病毒复制获得抗病毒的转基因植物。 3、抗除草剂植物 草甘膦是一种对环境无害的除草剂，功能是抑制5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶（EPSPS），在大肠杆菌中有EPSPS酶基因，转入植物可以代替自身被抑制的酶起到抗草甘膦的作用。 二、动物基因工程 外源基因转入受精卵细胞核中 移植到雌性受体的子宫 胚胎发育成后代 部分后代带有转入基因 培育纯合系 1、嵌合体动物（chimera mosaic animal） 只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物。 只有当外源基因整合到生殖细胞时，才能将其携带的外源基因遗传给子代。 2、转基因动物 所有细胞均整合有外源基因，则具有将外源基因遗传给子代的能力，称为转基因动物。 3、 转基因动物的方法 1）逆转录病毒感染法 是利用反转录病毒载体将外源基因转入动物胚胎早期细胞，与受体细胞核基因组整合，然后移植到受体动物中。 2）DNA显微注射法 利用显微注射仪将DNA注射入受精卵中。 通过激素使雌鼠超数排卵35个左右。 从雌性输卵管内取出受精卵。 将外源基因注射入受精卵中变大的雄性原核内。 DNA显微注射示意图 DNA显微注射器 精前核 卵细胞核 将25-40个受精卵移植入假孕雌鼠子宫内。 约3周受精卵发育成幼鼠。 从小鼠子代尾巴提取出DNA样品，进行鉴定。 进行交配来确定转入基因是否在其生殖系中。 通过对子代进行杂交产生纯合的转基因鼠。 获得转基因鼠的纯合鼠系 转基因鼠 ? 未转基因鼠 F1 ? F2 3)胚胎干细胞法 胚胎干细胞（embryonic