蛋白质的修饰和表达教案编写 .ppt

(3) 强的、可诱导的启动子 主要作用是促进转录的有效起始。原核细胞的启动子由-10区和-35区两部分组成。-10区是RNA聚合酶的牢固结合位点，-35区是RNA聚合酶的识别位点。 (4) 强的转录终止序列 高效表达的载体应该含有终止子，因为合成的mRNA过长，不仅消耗细胞内的底物和能量，且易使mRNA形成妨碍翻译的二级结构。 (5) 核糖体结合位点 原核微生物的mRNA结合核糖体的序列称为SD序列。SD序列对翻译效率有影响。 (6) 合适的多克隆位点 具有多个单一酶切位点的多克隆位点，便于外源基因插入和筛选。 2．与外源基因有效表达的相关因素 有效的转录起始 一个合适的高表达外源基因的启动子应符合以下几点：第一，必须是较强的启动子，表达效率在10-30%。第二，由启动子控制的本底转录很低。第三，启动子能够有一些简单及经济合算的方式诱导启动。 例如：T7启动子 转录终止区对外源基因表达效率的影响 转录终止有两种机制，一种是依赖六聚体蛋白rho的rho依赖性转录终止，rho蛋白能使新生RNA转录本从模板脱离。另一种是rho非依赖性转录终止，它特异性依赖与模板上编码的信号。 贯穿启动子的转录将抑制启动子的功能，造成启动子的封堵。 （3）mRNA稳定性的影响 mRNA的快速降解势必影响蛋白质的合成。 通常用非常强的启动子来弥补不稳定的mRNA的转录物。 (4)密码子偏好