口服心肌细胞培养液冻干物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长抑制的实验研究-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

四川医科大学硕士学位论文目 四川医科大学硕士学位论文 目 录 1 口服心肌细胞培养液冻干物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长抑制 的实验研究 1 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 6 1．4 材料与方法 15 1．5 结果 28 1．6 j时论 45 1．7 结论 52 1．8 参考文献 53 1．9 英汉缩略词对照表 64 2 致谢 65 3 心房利钠肽原的不同肽段的抗肿瘤机制(综述) 万方数据 四川医科大学硕士学位论文N月t,b肌细胞培养液冻干物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长抑制的 四川医科大学硕士学位论文 N月t,b肌细胞培养液冻干物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长抑制的 嘉验研萎摘 要 ILIYlllll2118l。i19116lll7lll5llllY2809675 目的：比较不同浓度的心肌细胞培养液(cardicac muscle cell culture medium，CMCM)对鼻咽癌CNE．2细胞的增殖活性的影响，初步确定 CMCM体外抑瘤效应的有效浓度。通过初步研究CMCM对鼻咽癌CNE．2 细胞的体外迁移能力的影响，为其对肿瘤细胞体内迁移能力影响的后期实 验研究提供实验基础。初步观察口服CMCM冻干物对人鼻咽癌裸鼠移植 瘤的生长、凋亡以及对裸鼠体重的影响，分析口服给药方式的可行性和有 效性，以及可能的不良反应，为将来CMCM冻干物的口服给药途径在恶 性肿瘤治疗的临床应用中提供科学的理论依据。方法：1、采用双酶消化 法原代培养Wistar乳鼠的心肌细胞，并收集对数生长期的细胞上清液，即 Wistar乳鼠的CMCM。用截留分子量为10KD的超滤离心管以4000转／ 分超低温离心10min，收集分子量小于10KD的滤液。用直径为0．22pro 的滤菌器过滤除菌后冷冻干燥成干粉，．20℃保存备用。2、采用MTT法 观察不同浓度的CMCM对鼻咽癌CNE．2细胞的增殖活性的影响，找出其 有效的抑瘤浓度；然后利用MTT法确定的有效抑瘤浓度进行划痕实验， 24h后观察CMCM对鼻咽癌CNE．2细胞的体外迁移能力的影响。3、采用 细胞悬液接种法建立人鼻咽癌CNE．2细胞的BALB／C裸鼠移植瘤模型。 当瘤体积平均值达lOOmm3左右时，将42只荷瘤裸鼠随机分为7组：腹 腔阴性对照组(25ml／kg生理盐水；nodal saline，NS)、腹腔CMCM组 (15mg／kg的CMCM溶于25ml／kg的NS中)、腹腔阳性对照组(2mg／kg 万方数据 的顺铂溶于25ml／kg的NS中；cisplatin，DDP)、灌胃阴性对照组(25ml／kg 的顺铂溶于25ml／kg的NS中；cisplatin，DDP)、灌胃阴性对照组(25ml／kg 的NS)、灌胃CMCM低剂量组(30mg／kg的CMCM冻干物溶于25ml／kg 的NS中)、灌胃CMCM中剂量组(60mg／kg的CMCM冻干物溶于25ml／kg 的NS中)和灌胃CMCM高剂量组(120mg／kg的CMCM冻干物溶于 25ml／kg的NS中)，每组6只，同时根据分组要求开始给药。各组裸鼠采 用每天灌胃给药的方式给予一次相应浓度的CMCM或NS，共14天。给 药期间每3天测一次裸鼠体重和肿瘤体积。停药24小时后处死裸鼠，迅 速将鼻咽癌CNE．2细胞的移植瘤分离并称瘤重，计算抑瘤率。采用脱氧 核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)检测移植瘤组织中的 细胞凋亡情况，Ki67免疫组化染色法检测瘤组织中肿瘤细胞的增殖情况。 结果：1、MTT结果显示：作用鼻咽癌CNE．2细胞48h后，1：4稀释的 心肌细胞培养液(1／4CMCM)、1：8稀释的心肌细胞培养液(1／8CMCM) 和1：16稀释的心肌细胞培养液(1／16CMCM)对鼻咽癌CNE．2细胞的 存活率与阴性对照组比较有增加的趋势(尸D．05)，而1：2稀释的心肌细 胞培养液(1／2CMCM)组和心肌细胞培养液原液(1／1CMCM)组中鼻咽 癌CNE．2细胞的存活率与阴性对照组比较有降低的趋势(尸D．∞)，表明 一定浓度的CMCM可以在体外抑制鼻咽癌CNE．2细胞的增殖。2、划痕 实验结果显示：作用鼻咽癌CNE．2细胞24h后，1／1CMCM和I／2CMCM 组与阴性组相比，细胞迁移距离更短，迁移速度更缓慢(尸D．05)。但是， 这两组间的细胞迁移距离比较无明显统计学差异(尸D．05)，表明一定浓 度的CMCM可以体外抑制鼻咽癌CNE．2细胞的迁移。3、虽然在给药后 万方数据 的实验观察期间，各组人鼻咽癌CNE．2细胞的裸鼠移植瘤的肿瘤体积均出 的实验观察期间，各组人鼻咽癌CNE．2细胞