肠出血性大肠埃希菌试验室诊断技术.DOC

肠出血性大肠埃希菌实验室检测 作者：白雪梅 2011-6-4 大肠埃希菌是人和动物肠道正常菌群的成员，但其中有些菌株能引起轻微腹泻至严重腹泻，有的菌株甚至能引起致死性并发症如溶血性尿毒综合征。依据不同的血清型别、毒力和所致临床症状，可将致腹泻的大肠埃希菌分为五类，即肠致病性大肠埃希菌，肠产毒性大肠埃希菌，肠侵袭性大肠埃希菌，肠集聚性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌。引起肠道感染的大肠埃希菌与正常菌群中的大肠埃希菌在普通平板上的表现相似，分离培养后可通过血清分型，毒力检测等加以鉴别。 肠出血性大肠杆菌（EHEC）因能引起人类的出血性肠炎而得名，严重者可发展成溶血性尿毒综合征(HUS)。EHEC最具代表性的血清型是0157:H7,但近年从腹泻和HUS患者分离的非0157的血清型也日益增多。比如O126:H8,O111:H7，O26:H11等，已达100多个血清型。 0157:H7作为研究最为深入的EHEC代表菌株已经具有比较成熟的分离培养和实验室诊断技术。标本采集主要为病人粪便标本，以采集腹泻病人血性水样便为主。同时也可采集水、食品、环境标本等。采集样本后尽快送实验室按如下程序检测 粪便或其他标本 增菌6h左右 磁珠富集 山梨醇-麦康凯培养基培养 18～24h 革兰氏染色 生化反应 血清学鉴定 毒力因子鉴定 肠道正常菌群中的大肠埃希菌约80％可发酵山梨醇，但0157:H7不发酵（或缓慢发酵）山梨醇，利用这一特点可用山梨醇麦康凯培养基筛选不发酵山梨醇的菌落作为可疑菌落，再通过生化鉴定，血清分型以及毒力基因检测作进一步确认。生化反应可确认可疑菌落为大肠埃希氏菌，血清学反应可检测出血性大肠埃希菌菌体抗原O157和鞭毛抗原H7。当然这些还是不够的我们还需要进一步确定这些菌株携带毒力因子的情况，可使用PCR方法进行。 但是通过以上的方法我们并不能鉴定非0157血清型的其他EHEC菌株，而这部分菌株所占的比例也是越来越重。对于这部分菌株我们可以在肠道选择鉴别培养基上挑选疑为大肠埃希菌的菌落( EMB平板上呈扁平，粉红色有金属光泽；MAC平板上粉红色或红色；SS平板上为红到粉红色或中央为粉红色周围无色的菌落；XLD平板上呈不透明黄色的菌落）。通过PCR方法检测可疑菌落是否携带志贺毒素基因，对于携带志贺毒素的可疑菌落再通过生化反应确定其为大肠埃希氏菌，血清学方法来确定它的血清型别。