灰葡萄孢致病和菌核形成相关基因功能的初步研究-植物病理学专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士研究生学位论文1．2．2灰葡萄孢BClG_09891、BClG一14375和BClG一12206基因的序列 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 1．2．2灰葡萄孢BClG_09891、BClG一14375和BClG一12206基因的序列 分析 ．13 1．2．3灰葡萄孢BCIG 05726、BCIG 09891、BClG 14375和BClG 12206 基因的表达分析 ．14 1．2．3．1基因组总RNA的提取 ．14 1．2．3．2 cDNA的合成 一15 1．2．3．3 RT-PCR检测基因表达 ．．15 2基因的敲除及验证 16 2．1基因组DNA的提取 16 2．2 KSl004质粒的提取 17 2．3同源重组的原理 ．17 2．4敲除转化片段的获得 18 2．5融合PCR扩增转化片段 19 2．6 PEG介导的灰葡萄孢原生质体转化 20 2．6．1灰葡萄孢原生质体的制备 ．20 2．6。2 PEG介导的转化 21 2．6．3敲除转化子的单孢纯化 一21 2．7敲除转化子的PCR验证 21 2．8敲除转化子的Southern BoR验证 21 3结果与分析 24 3．1灰葡萄孢BClG 05726、BClG 09891、BClG 14375和BClG 12206基 因序列分析 ．24 3．2灰葡萄孢基因BClG 14375、BCJ『G 09