高孟春杨敏邵兵李红岩胡建英固相萃取-北京大学城与环境学院.PDF

第 23 卷 　第 5 期 环 　境 　化 　学 Vol. 23 , No. 5 　 2004 年 　　9 月 ENVIRONMENTAL CHEMISTRY September 　2004 　 　 　 固相萃取LCMS 定性分析微生物呼吸醌方法的建立 1) 1 2) 1) 2) 高孟春 　杨　敏 　邵　兵 　李红岩 　胡建英 ( 1 　中国科学院生态环境研究中心 , 环境水质学国家重点实验室 , 北京 , 100085 ; 2 　北京大学环境学院 , 北京 , 100871) 　 摘要 　以UQ6 , UQ10 和Vitamin K 作为研究对象 , 建立了固相萃取LCMS 定性分析微生物 1 ( ( ) ) ( ( ) ) 呼吸甲基萘醌 MK n H 和泛醌 UQ n H 的方法 , 并用此法定性分析了厌氧活性污 x x 泥中的微生物呼吸醌. 该方法具有选择性强、灵敏度高的优点 , 是一种非常有效的微生物 种群分析方法. 关键词 　甲基萘醌, 泛醌 , 固相萃取 , LCMS. 　　随着微生物化学分类法的发展和人们对微生物呼吸醌认识的不断深入[1 —3] , 微生物呼吸 醌逐渐被应用到了污水处理系统的微生物化学分类中 , 成为一种非常有吸引力的分析微生物 生物种群结构的方法. 目前, 环境样品中的微生物呼吸醌主要采用LCUV 法测定 , 但是由于 环境杂质的干扰以及标准样品种类的有限性 , 大大地限制了呼吸醌的测定 , 因此, 需要建立 一种灵敏度高、选择性好、分离效果佳、具有特异性的微生物呼吸醌的分析方法. 　　本文建立了固相萃取LCMS 定性分析微生物呼吸醌的方法 , 并用此方法分析了厌 ( ( ) ) ( ( ) ) 氧活性污泥中的甲基萘醌 MKn Hx 和泛醌 UQ n Hx . 1 　实验部分 11 　实验方法 标准样品 UQ6 , UQ10 及 Vitamin K 均购自美国 Sigma 化学公司. 1 取约 02g 样品 (干重) 在冷冻离心机中离心 , 去掉水层 , 再加入 10ml 超纯水和 ( ) 20ml 三氯甲烷甲醇的混合液 2 ∶1 , V/ V , 振荡后离心. 离心管内的液体分成三层 , 去掉上面水层 , 用 Whatman No. 2 滤纸过滤 , 滤液收集到棕色瓶 A. 滤饼和滤纸放入棕 色瓶B 中 , 加入 30ml 三氯甲烷甲醇混合液, 振荡过滤 , 重复 3 次 , 滤液都收集到瓶A. 用真空旋转蒸发仪把瓶 A 的滤液蒸发到几乎干燥 , 加入 10ml 超纯水 , 用 20ml 己烷提取 两次 , 提取液放入棕色瓶 C. 将棕色瓶 C 的提取液通过己烷活化 SepPak Plus 硅胶萃取 ( μ ) 柱 内径 10mm , 长 20