附录基因工程操作中常用的溶液和缓冲液-国家级生物学试验教学中心.DOC

PAGE PAGE 118 附录一 分子生物学实验中常用的溶液和缓冲液 酸、碱和盐溶液的配制 盐酸（HCl，分子量36.5，重量百分比36%），1 mol/L 按以下顺序混合：912.5 mL H2O；87.5 mL浓盐酸。 盐酸（HCl，分子量36.5，重量百分比36%），0.25N/L 按以下顺序混合：978.4 mL H2O；21.6 mL浓盐酸。 硫酸（H2SO4，分子量98.07，重量百分比96%），1 mol/L 按以下顺序混合：944.8 mL H2O；55.6 mL浓硫酸。 硝酸（HNO3，分子量63.02，重量百分比71%），1 mol/L 按以下顺序混合：937.5 mL H2O；62.5 mL硝酸 冰醋酸（CH3COOH，分子量60.05，重量百分比99.5%），1 mol/L 按以下顺序混合：942.5 mL H2O；57.5 mL冰醋酸。 乙酸（CH3COOH，分子量60.5，重量百分比36%），1 mol/L 按以下顺序混合：840.5 mL H2O；159.5 mL 乙酸。 甲酸（HCOOH，分子量46.02，重量百分比90%），1 mol/L 按以下顺序混合：957.3 mL H2O；42.7 mL甲酸。 高氯酸（HClO4，分子量100.5，重量百分比70%），1 mol/L 按以下顺序混合：914.5 mL H2O；85.5 mL 高氯酸。 氢氧化钾（KOH，分子量56.1），1 mol/L 56.0 g KOH溶解于1 L H2O中。 氢氧化钠（NaOH，分子量40.0），1 mol/L 将40.0 g NaOH溶解于450 mL H2O中，补加H2O至1 L。 氢氧化钠(NaOH，分子量40.0)，10 mol/L 将400 g NaOH溶于450 mL水中，补加H2O至1 L。 氨水（NH4OH，分子量35.0，重量百分比25%），1 mol/L 按以下顺序混合：924.9 mL H2O；75.1 mL氨水。 尿素（CH4N2O，分子量60.06），8 mol/L 分批将480.5 g尿素溶解在600 mL蒸馏水中，加H2O定容只至1 L，过滤灭菌。 氯化钠（NaCl，分子量58.5），5 mol/L 将292.5 g NaCl溶于450 mL H2O中，补加H2O至1 L。 氯化钾（KCl，分子量74.5），1 mol/L 将74.5 g KCl 溶于450 mL H2O中，补加H2O定容至1 L。 氯化镁（MgCl2，分子量203.3），1 mol/L 将203.3 g MgCl2·6H2O溶于450 mL H2O中，加H2O至1 L，高压灭菌。 硫酸镁（MgSO4，分子量246.5），1 mol/L 将246.5 g MgSO4·7H2O溶于450 mL H2O中，加H2O至1 L。 氯化钙（CaCl2，分子量147.0或219.1），1 mol/L 将147.0 g CaCl2·2H2O溶于450 mL H2O中，加H2O至1 L， 或将219.1 g CaCl2·6H2O溶于450 mL H2O中，加H2O至1 L。 二、各种常见缓冲液和平衡盐的配制 10%SDS（十二烷基硫酸钠盐）： 称取100 g SDS溶解在800 mL水中，置68℃水浴中溶解，加数滴浓盐酸调pH到7.2，定容到1 000 mL 禽血DNA提取裂解液： 2 mol/L尿素 100 mmol/L Tris·HCl（pH 8.0） 1% SDS 100 mmol/L EDTA 现配现用，无需灭菌。 配制方法：600 mL蒸馏水中，顺序加入120.12 g尿素，待溶解后加入100 mL 1 mol/L Tris（pH 8.0），溶解后加入37.2 g Na2EDTA·2H2O，溶解后缓缓加入20% SDS 50 m 细菌DNA提取裂解液Ⅰ： 25 mmol/L Tris·HCl（pH 8.0），10 mmol/L EDTA（pH 8.0），50 mmol/L葡萄糖，使用前加溶菌酶（2 mg/mL）。 细菌DNA提取裂解液Ⅱ（碱-1% SDS）： 1%（W/V）SDS溶解在0.2 mol/L NaOH中。 酚(phenol)： （1）现在有商品酚可直接购买，但是要注意酚的pH值。 （2）酚的纯化和配制（提取核酸用的酚溶液）：如果购的酚不纯，例如市售酚含有杂质，常呈粉色或淡黄色，需要重蒸二次：用前从冰箱中取出，在68℃水浴锅中溶解结晶酚，160℃左右蒸馏后，冷却至0℃，加入8-羟基喹啉（100 g酚加0.1g8-羟基喹啉），酚变为黄色，8-羟基喹啉是抗氧化剂，并能部分抑制核糖核酸酶，含8-羟基喹啉的酚用等体积0.5 mol/L Tris-Cl（pH 8.0）磁力搅拌器搅拌20 min，约半小时后两