鸡Mx基因表达及其抗体血清制备的研究-动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

II经SDS．PAGE检测，结果显示，在甲醇浓度维持在1％时，鸡抗病毒Mx蛋白在毕 II 经SDS．PAGE检测，结果显示，在甲醇浓度维持在1％时，鸡抗病毒Mx蛋白在毕 赤酵母GSll5中获得良好表达，并且外源基冈表达蛋白约占上清蛋白总量的39．2％。 3．鸡尬基因组成型AAV-293细胞表达系的建立。本研究将鸡胁基因克隆至 plRES2．EGFP载体，并引入6*His标签。鉴定正确后，将质粒plRES2．EGFP．胁 转染AAV-293细胞，荧光倒置显微镜观察外源基因在细胞水平中的表达情况。并 经RT-PCR，Western blotting等方法从RNA、蛋白质水平鉴定该蛋白在细胞中的表 达。结果显示，目的基因实现了在AAV-293细胞中的表达，为稳定表达细胞系的建 立奠定基础。 4．基因免疫制备鸡Mx蛋白抗体血清的研究。采用基因免疫方法，将构建的真 核表达载体pcDNA3．0-彪勉用多聚乙酰亚胺(polyethylenimine，PEI)包裹后经肌肉 途径免疫小鼠，连续免疫4次后，收集抗体血清，以间接免疫荧光(IFA)检测检 测免疫血清抗体的效价，初步制备鸡Mx蛋白抗体血清。IFA结果显示：以1：50 倍比稀释的血清能够特异性识别Mx蛋白；局部放大细胞IFA图片显示Mx蛋白呈 颗粒状分布于细胞质中。 关键词：鸡；磁基因；表达；抗血清 Expression Expressio