板蓝根清热解毒功效实质研究.pptVIP

* * 板蓝根清热解毒功效实质研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院 方建国 刘云海 杜 光 王文清 汤 杰 等 湖北 宜昌 二○○七年七月二十九日 目录 一、研究背景 二、研究目标 三、关键技术 四、主要研究内容 4.1 板蓝根化学成分(群)的提取分离 4.2 解 “外源性之毒” 4.3 解 “内源性之毒” 4.4 板蓝根中化学成分与清热解毒相关活性评价 五、创新性 六、研究意义 项目来源： 国家自然科学基金 № № № 卫生部科学研究课题 № 98-2-110 获取奖项： 2004年度湖北省科学 技术奖自然科学三等奖 2006年度中华中医药学会 科学技术奖二等奖 研究背景 1988年——发现板蓝根具有抗内毒素活性 内毒素：存在于G－菌体的细胞壁内，在细菌死亡、细胞壁崩解时释出，化学本质为脂多糖(LPS)成分。可引起发热、中毒性休克、DIC、MODS等内毒素性疾病 科技部——8个中成药治疗SARS 有效，板蓝根颗粒是唯一单方口服制剂 SARS、人禽流感等病毒感染性疾病 肝、肺等重要器官受损 肠源性内毒素移位 内毒素血症 系列内毒 素性疾病 抗菌药 研究背景 活性物质基础 作 用 机 制 板蓝根 抗 内 毒 素 传统清热解毒功效 作用机制 现代 科学 中医清热解毒法实质 内毒素——中医“热毒”重要物质基础 抗内毒素作用——清热解毒方药的重要属性 清热解毒中药所解之“毒”—— “外源性之毒”（细菌、病毒、内毒素） “内源性之毒”(氧自由基、过度释放的细胞因子等） 研究背景 ？ 以抗内毒素活性为突破，寻找板蓝根中符合清热解毒功效的活性物质 提取分离板蓝根中化学成分(群) 评价其抗毒素活性 结合分子生物学方法探讨板蓝根抗内毒素作用机制 结合中医清热解毒法，对板蓝根有效组分及其化学成分、药理活性、分子生物学等方面开展全面研究，阐明其清热解毒的实质 研究目标 结合体内、体外、细胞分子生物学等方法，针对解“内源性之毒”和“外源性之毒”的机制，设计科学可行、经同行认可的实验方案。 抑菌活性评价 抗病毒活性评价 抗炎活性评价 抗内毒素活性评价 对于炎性细胞因子的影响 对于氧自由基的影响 对于机体免疫功能的影响 板蓝根中重要化学成分与清热解毒相关活性评价 关键技术 主要研究内容 以药理活性评价为指导，重点对板蓝根中高极性部位进行化学分离，从中获得具有与板蓝根清热解毒功效相符的活性物质 不同极性溶剂对板蓝根醇提液分级萃取—— 板蓝根各化学部位：F01～F04 运用硅胶柱层析、薄层层析等分离方法—— 板蓝根各组分F021～F024 及化学成分 运用光谱、质谱、核磁共振等现代分析手段—— 化合物结构测试 4.1 板蓝根化学成分(群)的提取分离 提取分离流程 板蓝根化学成分 新化合物 结论——获得39个单体化合物，13个已知成分， 18个菘蓝属中首次发现(其中3个为首次 从天然界中发现，6个为新化合物) 抑菌活性——采用管碟法，板蓝根及其化学部位对于金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等典型致病菌具有体外抑菌活性 抗病毒活性评价——Hep-2细胞体外培养系统观察细胞病变效应（CPE），噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性，板蓝根及其化学部位可抑制HSV-Ⅰ等典型呼吸道病毒 抗炎活性评价——采用小鼠急性耳廓肿胀法和大鼠棉球肉芽肿法，板蓝根及其化学部位对炎症不同阶段具有抑制作用 4.2 解“外源性之毒” 主要研究内容 体外实验筛选板蓝根的抗内毒素活性部位 动态浊度法测定不同化学部位对于内毒 素的体外降解作用 透射电镜观察不同化学部位对于内毒素 形态结构的影响 体内实验筛选板蓝根的抗内毒素活性部位 对放线菌素D敏化小鼠内毒素致死攻击的影响 对D-氨基半乳糖敏化小鼠内毒素致死攻击的影 响 板蓝根抗内毒素活性部位的确证实验 对内毒素诱导家兔发热的拮抗作用 对内毒素性DIC家兔血清LPO、SOD水平的影 响 对内毒素性DIC家兔肾小球微血栓形成的影响 板蓝根含药血清的抗内毒素活性评价 体 内 体 外 多层次 多环节 多靶点 板蓝根抗内毒素活性部位的研究 体外实验筛选板蓝根的抗内毒素活性部位