课件：血型分子基础与应用.ppt

cisAB与B（A）的分子基础 极少数人类个体的一条染色体中同时存在一个cisAB或B（A）基因，它编码的酶可以同时催化A抗原和B抗原的合成。 cisAB或B（A）是从一个亲本遗传而来的，因此即便其基因型是cisAB / O或 B（A） / O，也会表现为AB型，若与O型血的人（基因型O / O）生育，子女的血型可能是AB或O，而不像通常AB型血与O型血的父母只能有A或B型血的子女。 cisAB与B（A）的分子基础 CisAB与B（A）——4个关键位置氨基酸替代 A糖基转移酶: AAAA B糖基转移酶: BBBB cisAB酶： AAAB ；BBAB等 B(A)酶：BABB ；BBBB等 孟买型与类孟买型的分子基础 孟买型 属H缺乏的非分泌型，其个体红细胞和分泌液中均检测不到ABO抗原。 类孟买血型 是H缺乏的分泌型，其特点是红细胞表面缺乏ABH抗原，而在唾液等分泌液中却可以找到ABH血型物质。 ABO血型亚型与突变基因关系 ABO亚型的基础是基因改变 ABO突变基因种类远远多于根据ABO血清学亚型数量, 目前发现的形成亚型的突变基因超过100种(Genbank中登记的超过200种） 每1种ABO亚型可以由多种不同的突变的ABO基因决定, 不同的基因型之间往往可产生细微的血清学表现差异 血清学表现存在个体差异, 相同的突变基因可产生略有不同的血清学结果 严格划分不同ABO亚型的突变基因比较困难 ABO血型亚型与突变基因关系 血清学检测易受主客观因素的影响，常常遇到和任何现有亚型血清学特点均不能完全相符的情况，在没有确切的证据证明为1种新的ABO亚型之前，根据其主要的血清学特点,，将其纳入现有的亚型框架 合理的定义ABO亚型，可以使我们大致了解该1份血标本表达的ABO抗原强度, 是否存在或容易产生不规则抗-A、抗-B及抗-H, 是否存在相应血型物质等线索, 对其临床意义、遗传特性的判断等也能提供很有意义的信息 已有报道，符合血清学特点的ABO亚型，基因检测结果与之不符 ABO血型基因的临床应用 解决出现血型表型分型困难及出现的输血等困难 血型基因分型的优点： ——不受检材限制，各种有核细胞如毛囊、组织块、血痕、羊水等都可作为检材而不必考虑表达问题, ——不受血清中自身抗体、不规则抗体的影响 ——不受疾病的影响，某些疾病如肿瘤、白血病等引起的血型抗原表达异常所致的血型“转变”可直接定基因型 ——可快速解决血型鉴定中的假凝集、弱凝集(如细菌污染、血浆蛋白紊乱等所致)现象 ABO血型基因的临床应用 新生儿及胎儿溶血病产前诊断 ——早期鉴定胎母血型不合有助于实施干预治疗 ——早期产前诊断标本主要为羊水细胞，羊水细胞多为死亡的细胞，ＤＮＡ存在不同程度的降解，基因检测要求内参对照以确保结果准确 ——母体血浆获得胎儿的ＤＮＡ样本，应注意评估可能出现的母体ＤＮＡ的污染问题，检测母体血浆和细胞的ＳＴＲ位点以保证结果的准确性 ABO血型基因的临床应用 作为个体特异性的遗传标志物 ——用于ＡＢＯ血型不合造血干细胞移植后嵌合体监测，指导ＡＢＯ血型不合移植后临床输血支持治疗 ——家系遗传学分析 ABO血型基因检测技术 核心技术：聚合酶链反应 PCR-RFLP PCR-SSP DNA序列测定 PCR－RFLP 原理： ——PCR扩增出包含突变位点的特定片段 ——利用突变位点特异的限制性内切酶消化ABO基因扩增产物 ——特定的片段经凝胶电泳检测便能获得ＳＮＰ的特征 ——以ＳＮＰ组合的方式鉴定ＡＢＯ基因型。 PCR－SSP 目前最常用的基因分型技术，PCR 扩增产物通过凝胶电泳进行分析。 根据基因座特异的SNP特征设计相应的序列特异性引物 PCR扩增产物的有无是鉴定特异性等位基因的基础 本法也存在一定假阳性率，有学者选择在SSP的３′末端即SNP位置的倒数第２或第３个位置上设计错配以提高引物的扩增特异性。 注意选用不具外切酶活性的TaqDNA聚合酶，否则容易出现假阳性扩增。目前有单管扩增的PCR检测模式，也有多重PCR同管扩增的模式 PCR—SSP ABO基因测序 通过PCR扩增基因的主要片断，对产物进行序列分析，对照标准基因片断，分析基因突变的碱基以确定血型 结果准确可靠 需要特殊的仪器设备 操作复杂，成本高 一个带有B(A)700CG突变的 B(A)02家系 700G 700C 703A/G 703 A B(A) 02 (700CG) B/O individuals nt640 nt641 Normal B 101 allele B(A) 640AG allele Genbank accession: DQ124679 B(A) 641TC allele Genbank accession: DQ12