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食品微生物检测实验部分教材大纲;第一部分 消毒;进入无菌室前的准备 1.1实验前放好需用的实验器材及各种培养基，打开紫外 灯消毒30－60min。 1.2手部的消毒：进入无菌室前，先用肥皂清洗双手，在 消毒水中浸泡双手3min后用水冲洗。 1.3进入缓冲室：换鞋子或穿鞋套，戴口罩、帽子、手 套，穿衣服（有风淋室的，需在风淋室转动站立5min）。 称样品 2.1手部的消毒 2.2镊子、剪刀、勺子的消毒。 2.3样品包装口的消毒（一个样品换一把镊子、剪刀或勺 子）。;实验结束后的消毒 3.1用过的实验器材经高温消毒后再清洗。 3.2实验台面用消毒水擦洗干净。 3.3换下的鞋套、口罩、帽子、衣服放入专 用垃圾袋进行消毒处理。 3.4清洗双手：先用肥皂清洗双手，在消毒 水中浸泡双手3min后用水冲洗，再用肥皂清 洗双手。 3.5打开紫外灯消毒30－60min。;第二部分 菌落总数测定;检验依据GB/T 4789.2－2003 菌落总数的定义 食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度 和时间、PH、需氧性质等），所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。 设备和材料 冰箱 电子天平 均质器 恒温水浴锅 恒温培养箱 干燥箱 架盘药物天平 灭菌吸管：1mL、10mL 灭菌培养皿：直径90mm 灭菌剪刀、镊子、勺子等 酒精灯;培养基和试剂 营养琼脂 0.85％灭菌生理盐水 75％酒精棉球 ;检验程序 检样稀释及培养 1.1以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌 生理盐水的塑料瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中处理。 1.2用1mL灭菌吸管吸取1：10的稀释液1mL，沿管壁徐徐注 入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及 管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。 1.3另取1mL灭菌吸管，按1.2操作方法，做10倍递增稀释， 如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。;1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2 －3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸 取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释 度做两个培养皿。 1.5稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃左右营养琼脂 （可放置46℃±1℃水浴锅保温）注入培养皿约15mL，并转 动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂注入加有1mL稀释液 灭菌培养皿内作空白对照。 1.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱内培 养48h±2h。 1.7作空白对照的作用 琼脂表面长菌说明空气中带菌，平皿边上长菌说明平皿受 到污染，琼脂中间长菌说明稀释液或琼脂带菌。;菌落总数操作步骤;菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检 查，以防遗漏。记下各平板的菌落数，求出同稀释度的各平 板平均菌落总数。 菌落计数的报告 3.1选取菌落数在30－300之间的平板作为菌落总数测定标准。 一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数。若两个 平板中有一个平板有较大片状菌落生长时，应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落生长不到平 板的一半，而其余一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平 板后乘2以代表全皿菌落数，再采用两个平板平均数作为该 稀释度的菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无 明显界线），一条链可视为一个菌落计数。;3.2稀释度的选择 3.2.1选择平均菌落数在30－300之间的稀释度，乘以稀释倍 数报告之（见表1中例1）。 3.2.2若两个稀释度的平均菌落数均在30－300之间，则视两 者之比决定。若比值≤2，报告其平均数；若＞2，报告其中 较小的数字（见表1中例2及例3）。 3.2.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，按稀释度最高 的平均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例4）。 3.2.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，按稀释度最低的 平均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例5）。 3.2.5若所有稀释度均无菌落生长，以小于1乘以最低稀释倍 数见表1中例6）。 3.2.6若所有稀释度的平均菌落数均不在30－300之间，其中 一部分大于300，一部分小于30时，按最接近300或30的平 均菌落数乘以稀释倍数（见表1中例7）。;3.3菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告；大于 100时采用两位有效数字： ①小于5舍去， ②大于5进一位;表1 稀释度的选择及菌落数报告方式;注意事项 4.1每做一个稀释度换用1支吸管。 4.2每支吸管使用前在酒精灯上消毒，从吸管筒拿出来的吸管 即使没有用过，也不能放回吸管筒里。 4.3在做稀释度时，注意吸管尖端不要触及管内