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实验1 显微镜的使用 一、实验目的和内容 目的：学习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。 内容： 1．学习油浸系物镜的使用方法。 2．用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。 二、实验材料和用具 枯草芽孢杆菌（Bacillus subitilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的染色装片。 香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。 三 显微镜的构造与成像原理 （一）显微镜的构造包括机械部分和光学部分 1．机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、移动器、粗调器和细调器。 （1）镜座和镜臂 它们是显微镜的基本骨架，起稳固和支持显微镜的作用。 （2）镜筒 镜筒上接目镜，下接转换器，形成目镜与物镜（装在转换器下）间的暗室。 （3）物镜转换器 物镜转换器上可安装3-4个物镜，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。 （4）载物台用于安放玻片。载物台中有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。 （5）推动器是移动标本的机械装置。 （6）调焦装置即粗螺旋和细螺旋，是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件。 2．光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、反光镜。 显微镜的光学系统 （l）反光镜由一平面和另一凹面的镜子组成，可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央，照明标本。 （2）聚光器 在载物台下面，它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上，以得到照明，使物象获得明亮清晰的效果。 （3）物镜 物镜的种类很多，可从不同角度来分类： 根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同，可分为： ①干燥系物镜以空气为介质，如常用的40X以下的物镜，数值孔径均小于1。 ②油浸系物镜常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90 X-100 X，数值孔径值N.A大于1。 根据物镜放大率的高低，可分为： ①低倍物镜指l0X以下； ②中倍物镜指20X； ③高倍物镜指40X-65X； ④油浸物镜指90X以上。 （4）目镜 目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次，并把物像映入观察者的眼中。普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成，上端的一块透镜称“接目透镜”，下端的透镜称“聚透镜”。上下透镜之间或在两个透镜的下方，装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”。 （二）显微镜的成像原理 显微镜的放大是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差，影响像质。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好。 显微镜的结构 光线在穿过折射率不同的介质时发生折射。 （三）显微镜的性能 显微镜分辨能力的高低决定于光学系统的各种条件。被观察的物体必须放大率高，而且清晰，物体放大后，能否呈现清晰的细微结构，首先取决于物镜的性能，其次为目镜和聚光镜的性能。 油镜头的辨认 油镜头上常刻有OI（oil immersion）或HI（homogeneneous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记，在低倍物镜、高倍物镜和油镜3物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numerical aperture）最大，而工作距离最短。 ?四、操作步骤 （一）观察前的准备 1．放置：将显微镜置于平稳实验台上，镜座距实验台边沿约为10cm。坐正，练习用左眼观察。 2．调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察未染色装片时，光线不宜太强。 （二）低倍镜观察染色装片 首先上升镜筒，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升（或使镜台下降）至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。 （三）高倍镜观察 眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相撞。再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。不要移动装片位置，准备用油镜观察。 （四）油镜观察 1．提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位（镜头的正下方）滴一滴香柏油。 2．从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。 3．将光线调亮，左眼