发酵工程与设备第二章、第二讲发酵工业菌种的分离筛选.ppt

举例:产植酸酶黑曲霉的分离 植酸酶是催化植酸及其盐类水解成肌醇与磷酸的一类水解酶的总称 植酸即肌醇六磷酸脂。植酸及其盐类是植物中磷的主要贮存形式。植酸酶广泛存在于小麦、大麦、玉米等植物的种子中，但含量较低。细菌、酵母和丝状真菌等也是植酸酶的重要来源。 结果 筛选培养基配方 （1）1%脱氧胆酸钠溶液。 （2）氯霉素眼药水。 （3）筛选培养基0.2%植酸钙、3%葡萄糖、0.5%NH4NO3、0.05%KCl、0.05%MgSO4·H2O、0.003%MnSO4·4H2O、0.003%FeSO4·7H2O、2%琼脂、PH 5.5~7.5。 富集培养基配方 2%植酸钙、0.2%NH4NO3、 0.1%K2HPO4·3H20、 0.002%CaCl2 、 0.05%KCl、 0.05%MgSO4·H2O、 0.001%MnSO4·4H2O、0.001%FeSO4·7H2O、PH 5.5~7.5。 * 二 发酵工业菌种的分离筛选 Chapter 2 continued 发酵工程工业生产水平 的三个决定要素: 生产菌种的性能 发酵和提取工艺条件 生产设备 获得优良的生产菌种是实现高水平发酵工程工业生产的第一环节. 1、菌种分离与筛选工作程序 发酵工业上使用的微生物菌种，最初都是从自然界中分离筛选出来的。 分离与筛选菌种的具体做法一般分4个步骤： 样品采集 增殖培养 纯种分离 生产性能测定 调查研究（包括资料查阅） 试验方案设计 采样 第一次增殖培养 第一次平板分离 第二次增殖培养 第二次平板分离 增殖条件探索 根据实际情况进行定量或半定量测定 第一次原种斜面 第二次原种斜面 初筛（1株1瓶） 定量或半定量测定 筛 选 工 作 程 序 第三次平板分离 第三次原种斜面 复筛 第四次平板分离 不纯 第四次原种斜面 再复筛 种子培养 初步工艺条件摸索 较优菌株 1株3-5瓶 保藏及进一步做生产性能试验或作为育种的出发菌株 某些必要试验和毒性试验 第三次菌种保藏 2、分离与筛选的设计要求 在筛选所需菌株时应考虑以下一些重要指标： 1、菌的营养特征 一般要求采用廉价的培养基或使用来源丰富的原料 2、菌的生长温度 3、菌的稳定性 4、菌的产物得率和产物在培养液中的浓度 5、菌对所采用的设备和生产过程的适应性 6、容易从培养液中回收产物 3-6是用来衡量菌种的生产性能，如能满足这几条，便有希望成为效益高的生产菌株 3、含微生物样品的采集 较复杂；应根据分离目的灵活掌握 土壤（丰富、 5-25cm、土质、酸碱度、植被状况、地理条件、季节） 食品 、海水、动物、植物、极端环境 根据微生物的营养类型采样 森林土中有相当多枯枝落叶和腐烂的木头，富含纤维素，适合利用纤维素作碳源的纤维素酶产生菌生长。 肉类加工厂附近、饭店排污沟，易分离到蛋白酶和脂肪酶产生菌。 面粉加工厂等场所易分离到产淀粉酶、糖化酶的菌 根据微生物的生理特性采样 筛选高温酶产生菌通常从温泉、火山爆发处、堆肥等采样； 筛选产低温酶的微生物，可从冰窖、南极、深海等采样 分离耐高渗透压酵母菌，可到甜果、蜜饯、甘蔗渣堆积处采样 4、含微生物样品的富集培养 富集(enrichment)培养 是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适的环境下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需的菌株。 ? 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件，例如，供给特殊的基质或加入某些抑制剂。 控制氧可将好氧微生物和厌氧微生物分开； 高温下培养可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开； 控制pH可分离嗜酸或嗜碱微生物； 高糖或高盐培养基可分离耐高渗透压微生物； 在分离培养中加入抗生素或某试剂可增加选择性 如分离真菌可在土豆培养基中加入链霉素； 分离细菌或放线菌可在培养基中加入制霉菌素等 ? 需注意，所需菌型生长的结果有时会改变培养基的性质，从而改变选择压力。 ? 重复移植几次后接种少量已富集的培养物到固体培养基上。 ? 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势的情况下进行。 5、利用固体平板的生化反应进行分离 （方法之一） ? 利用特殊的分离培养对大量混杂微生物进行初步分离的方法。 ? 分离培养基是根据目的微生物特殊的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计的。 ? 可显著提高分离效率 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑菌圈法 透明圈法 ? 分离水解酶产生菌时较多