用FRET技术研究TLR4与MD-2相互作用.PDFVIP

2006;26(8) 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 1101 · · 用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用 刘亚伟 刘靖华 唐靖 赵清 李建军 赵明哲 李志杰 王国军 钟田雨 邓 鹏 姜 勇 南方医科大学基础医学院 , , , , , , , , , , ( 广东省功能蛋白质组学重点实验室 广东广州510515 , ) 摘要 目的 利用荧光共振能量转移 技术在活体细胞研究人 样受体 与髓样细胞分化蛋白 FRET Toll TLR4 2MD-2 : ( ) ( ) ( ) 的相互作用 方法 用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列 不包括信号肽序列 并分别亚克隆入带TLR4 。 ( ) 信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体 pECFP-C1-SPpEYFP-C1-SP中 重组质粒经酶切 序 ( , ) , 、 列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞 用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况 并用常规的方法和受体光 , , 漂白的方法对共表达青色荧光蛋白 CFP-TLR4和黄色荧光蛋白 YFP-MD-2的细胞进行FRET分析 结果 重组质粒 ( ) ( ) 。 在 细胞中得到表达 仅转染 或 的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内 以 HEK293 , pECFP/TLR4 pEYFP/MD-2 , 核周较多 而共转染 和 的细胞可同时检测到青色和黄色荧光 主要分布在细胞膜 同时胞 ; pECFP/TLR4 pEYFP/MD-2 , , 质也有少量表达 无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法 对共表达 和 的细胞进行 。 , CFP-TLR4 YFP-MD-2 FRET 分析结果表明有 现象的发生 提示 和 有相互作用并形成复合物 结论 本研究为 和 在 FRET , TLR4 MD-2 。 TLR4 MD-2 活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。 关键词 样受体 髓样细胞分化蛋白 荧光共振能量转移 Toll 4 2 : ;