放射性土壤杆菌产可得然胶液体发酵工艺研究.docx

放射性土壤杆菌产可得然胶液体发酵工艺研究张海龙1，赵双枝2，董学前2（1齐鲁师范学院生物系，济南 250013；2山东省食品发酵工程重点实验室，济南 250013）摘 要：目的：提高放射性土壤杆菌L Q109液体发酵生产可得然胶的产量。方法 放射性土壤杆菌产可得然胶液体发酵工艺研究 张海龙1，赵双枝2，董学前2 （1齐鲁师范学院生物系，济南 250013；2山东省食品发酵工程重点实验室，济南 250013） 摘 要：目的：提高放射性土壤杆菌L Q109液体发酵生产可得然胶的产量。方法：采用单因素和正交试验 对放射性土壤杆菌 L Q109产可得然胶液体发酵培养基和培养条件进行了优化。结果：优化后的最佳培养基及最 适培养条件为：葡萄糖 6.0％，(NH4) 2HPO40.24%，营养因子浓缩液0.25％，KH2PO40.20%，MgSO4·7H2O0.10%， CaCO30.20%，装液量 80m L，p H7.0，30℃下 180r/min 摇瓶培养120h。结论：菌株在优化后的培养基和培养条件下， 生产能力明显提高，可得然胶产量达42.0g/L，糖胶转化率高达70%。 关键词：放射性土壤杆菌；可得然胶；液体发酵工艺 可得然胶（Curdlan）是一种新型的微生物胞外多 糖，具有独特的热成胶性能，很强的热稳定性能（凝胶 的熔点高达140℃），并且其胶体结构在冷冻和解冻条件 下均能保持稳定，被作为稳定剂、凝固剂、增稠剂、持 水剂、粘合剂、成膜剂等广泛应用于食品工业各个领域 [1]。研究发现，可得然胶的衍生物，具有抗肿瘤、抗细 菌、抗病毒及提高机体的免疫力等生理活性[2-5]，这使 得可得然胶在制药工业也具有巨大的市场潜力。研究表 明，碳源种类、初始碳源浓度、氮源种类和浓度、温度、 发酵液初始pH等因素对菌体的生长和多糖的合成都有一 定的影响[6-8]。本研究通过对主要营养因素及发酵条件的 优化，大大提高了多糖的产量及葡萄糖转化率。 MgSO4·7H2O0.10 ％ ；CaCO30.50 ％ ；营养因子浓缩液 0.20％ ；pH7.0，121℃灭菌20min。 1.3 培养条件 1.3.1 种子培养 从活化的斜面菌种上挑取单菌落接入装有80mL种 子液培养基的500mL三角瓶中，30℃，180r/min下摇床 培养24h。 1.3.2 摇瓶发酵培养 500mL三角瓶装液量80mL，接种量5 ％（V/V）， 30℃，180r/min下摇床培养120hr。 1.4 分析方法 1.4.1 可得然胶产量的测定 取100g发酵液，加入100mL 2mol/L NaOH溶液，充 分溶解1h，9 000r ／ min离心10min，弃沉淀取上清， 加入5mol/L HCl中和至pH在6—7之间，离心，获得可 得然胶沉淀。将沉淀加蒸馏水洗涤、离心2次，在60℃ 烘干至恒重后称量。 1 材料与方法 1.1 菌株 放射性土壤杆菌（Agrobacterium cradiabacter）LQ109。 1.2 培养基 1.2.1 斜面培养基 1.4.2 凝胶强度的测定 葡萄糖1.00％ ；蛋白胨0.50％ ；牛肉膏0.30％ ； NaCl 0.50％ ；营养因子浓缩液 0.15％（实验室配制）； 琼脂 1.50％ ；pH 7.0，121℃ 灭菌20min。 ①发酵液凝胶强度的测定：取一定量发酵液倒入 18×180mm的试管中，90℃维持10min，拿出后凉至室 温，测定凝胶强度。②2％产品凝胶强度的测定：产品 过100目筛，准确称取0.20g，加入18×180mm的试管 中，准确加入10mL水，90℃维持10min，拿出后凉至室 温，测定凝胶强度。③残糖测定：婓林试剂法。 1.2.2 种子培养基 葡萄糖2.00％ ；(NH4)2HPO4 0.50％ ；KH2PO40.15％ ； MgSO4·7H2O0.10 ％ ；营养因子浓缩 液0.15 ％ ； CaCO30.30％ ；pH7.2，121℃灭菌20min。 2 结果与分析 1.2.3 发酵培养基 葡萄糖5.00％；（NH4）2HPO4 0.20％ ；KH2PO40.20％ ； 2.1 碳源对发酵产胶的影响 作者简介：张海龙（1979— ），男，山东寿光人，硕士，讲师，研究方向：发酵工程。 第2期张海龙等：放射性土壤杆菌产可得然胶液体发酵工艺研究43碳源是发酵生产可得然胶的主要原料，碳源种类对于发酵结果影响非常大，在基础培养基中添加葡 萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖 4 种碳源，浓度皆为4％进行试验，结果（表 1）表明，碳源种类对于产胶 率的影响非常明显，在上述 4 种碳源中，葡萄糖和蔗 糖作为碳源时产胶率最高，但从凝胶质量来看，葡萄 糖做碳源时，凝胶质量最好。故选择葡萄糖作为最佳 碳源。表1