肿瘤细胞侵袭实验(Tumour Invasion Assay).docxVIP

HYPERLINK /experiment/433.htm 肿瘤细胞侵袭实验（Tumour Invasion Assay） 肿瘤细胞侵袭实验（Tumour InvasionAssay）可以：（1）研究各种细胞因子对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响；（2）一些抑制血管生成的新药研究；（3）研究肿瘤细胞侵袭和转移机制。 实验方法 Matrigel 基质膜模型 实验方法原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。 滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜，这与体内情况较为相似。 铺有Martrigel的滤膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，如一定浓度的LN、FN或小鼠3T3条件培养液或人睾丸上皮成纤维细胞培养液，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。细胞穿膜所用的时间与Martrigel的用量有关，选择 25ugMartrigell铺膜，16小时后观察结果较为合适。穿过滤膜的细胞多数粘附在滤膜下表面，可用棉签将上表面的细胞拭去，然后用乙醇固定滤膜，PE染色，在光镜下观察统计穿过Martrigel的细胞数。另外用Transwell小室也可进行重建基质膜侵袭分析，这一方法是在 Transwell小室吊篮式上腔的滤膜上铺上30ugMartrigel，加入细胞72h后观察结果。值得注意的是，细胞在TransWll腔中培养 72小时后，有相当数量穿过滤膜的细胞不再粘附在滤膜下表面，而是脱落进人下腔溶液中．因此统计穿过基质膜的细胞数目时应把这部分细胞考虑在内。肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。 在上述分析中，如果不在膜上铺Martrigel而直接将8um孔径滤膜安放在侵袭腔室上下腔室之间，细胞通过变形运动穿过滤膜，用这种模型对分析细胞运动能力和药物对细胞运动能力的影响。另外，在下室中加有LN或FN或在滤膜下表面铺上LN或FN，可分析药物对肿瘤细胞的趋化性或趋固性的影响。 实验材料 HYPERLINK /product/Matrigel+%E5%9F%BA%E8%B4%A8%E8%83%B6 \t _blank Matrigel 基质胶 试剂、试剂盒 HYPERLINK /reagent/DMEM \t _blank DMEM HYPERLINK /reagent/%E7%BB%93%E6%99%B6%E7%B4%AB%E6%9F%93%E6%96%99%E6%BA%B6%E6%B6%B2 \t _blank 结晶紫染料溶液 HYPERLINK /reagent/%E9%86%8B%E9%85%B8 \t _blank 醋酸 HYPERLINK /reagent/%E4%BD%8E%E8%A1%80%E6%B8%85DMEM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA \t _blank 低血清DMEM培养基 HYPERLINK /reagent/FBS-DMEM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA \t _blank FBS-DMEM培养基 HYPERLINK /reagent/IFN-%CE%B3 \t _blank IFN-γ 仪器、耗材 HYPERLINK /equipment/24-transwell+%28Coster%29 \t _blank 24-transwell (Coster) HYPERLINK /equipment/%E7%A6%BB%E5%BF%83%E7%AE%A1 \t _blank 离心管 HYPERLINK /equipment/%E5%86%B0%E7%AE%B1 \t _blank 冰箱 HYPERLINK /equipment/%E7%A6%BB%E5%BF%83%E6%9C%BA \t _blank 离心机 HYPERLINK /equipment/%E7%A7%BB%E6%B6%B2%E6%9E%AA \t _blank 移液枪 HYPERLINK /equipment/%E6%9E%AA%E5%A4%B4 \t _blank 枪头 HYPERLINK /equipment/%E6%9E%AA%E5%A4%B4%E7%9B%92 \t _blank 枪头盒 实验步骤 一、溶液配制 1. DMEM （1）NE---A液（1 μg