莱茵衣藻酸化敏感突变体库的建立.pdfVIP

目录 中文摘要 I Abstract II 第一章 前 言 1 第一节 莱茵衣藻及其研究进展 1 1.1 莱茵衣藻简介 1 1.2 衣藻在遗传学研究领域的优越性 3 1.3 莱茵衣藻的相关研究 3 第二节 水体酸化 5 2.1 水体酸化概述 5 2.2 水体酸化的危害 5 第三节 遗传转化相关技术的应用 6 3.1 农杆菌转化 6 3.2 电击转化 7 3.3 基因枪法 7 第四节 本实验研究目的及意义 7 第二章 材料与方法 9 第一节 实验材料及设备 9 1.1 实验衣藻 9 1.2 实验载体 9 1.3 实验设备 9 第二节 实验药品 9 第三节实验方法10 3.1 衣藻培养10 3.2 衣藻固定及显微观察：12 3.3 衣藻对常用抗生素敏感性筛选12 3.4 莱茵衣藻DNA 提取及检测14 3.5 质粒酶切及沉淀回收17 3.6 衣藻电击转化18 3.7 衣藻酸敏感筛选19 第三章 实验结果20 第一节 常用抗生素对莱茵衣藻生长的影响20 1.1 莱茵衣藻在不同抗生素中的生长情况分析20 1.2 抗生素对莱茵衣藻颜色变化情况统计21 第二节 衣藻电击转化22 2.1 衣藻电击转化体系及参数22 第三节 衣藻酸敏感突变体库构建23 3.1 莱茵衣藻电击转化抗性筛选23 3.2 莱茵衣藻酸敏感筛选24 第四节 不同pH 值对衣藻酸敏感突变体生长影响25 4.1 第一批莱茵衣藻的培养25 4.2 第二批莱茵衣藻的培养26 4.3 突变体在不同pH 值下的表型27 结论32 讨论33 致谢34 参考文献36 中文摘要 目前，水体酸化环境问题已经引起了社会的高度重视，除了无机酸以外，各 种有机酸也是导致环境酸化的重要因素。衣藻的生长繁殖可以作为评价环境条件 的重要指标。除酸化外，水体因为过度蒸发而导致的盐碱化，也深深地影响着藻 类植物的生长。由于水体酸化与盐碱化越来越严重，深刻地影响了水域生态系统 的平衡和环境的安全。 本研究以单细胞模式藻类—— 莱茵衣藻 （Chlamydomonas reintmrdti ）作为实 验材料，主要进行了以下三项实验研究：（1）为了防止微生物对莱茵衣藻的污染， 我们通过对莱茵衣藻在不同抗生素及其浓度下的生长敏感程度，发现莱茵衣藻在 含有一定浓度的卡那霉素、四环素、链霉素的培养基中非常敏感，它们常常会导 致莱茵衣藻的死亡，对氯霉素在低浓度时不敏感，高浓素 （高于 50μl/ml ）时敏 感，而对氨苄青霉素、头孢霉素和利福平不敏感，在含有这三种抗生素进行培养 时，莱茵衣藻能够正常生长，该三种抗生素可用于防止污染；（2 ）本研究接下来 通过优化电击转化方法，采用电穿孔获得了5000 个莱茵衣藻转化子，从中获得 90 多个酸化敏感的莱茵衣藻突变体；（3 ）针对上述酸化敏感突变体，测定其在不 同酸性pH 条件下的生长状况，与正常pH 值条件下相比，生长减缓，并与野生 型进行比较，评价其对低pH 的响应。 莱茵衣藻作为一种模式生物，近年来其分子遗传学的研究取得了重要的进展 和许多创新型的成果。我们筛选获得的酸化敏感突变体，为进一步解析生物体对 酸化环境适应性的分子机制奠定基础。 关键词 莱茵衣藻；突变体库构建；酸敏感；抗生素敏感性 I Abstract At present, the acidification of water bodies has caused a great deal of attention to society. In addition to inorganic acids, various organic acids are also important factors leading to environmental