聚合物合金法制及性能.docxVIP

　　本文作者刘华蔚温伟生孙华燕郑爱萍胡敏陈丽洁工作单位解放军总医院口腔医学研究所传统复乳法及聚合物合金法制备缓释微球1传统复乳法采用复乳-溶剂挥发法制备缓释微球，300μ的和10牛血清白蛋白溶于100μ的去离子水中得内水相1;-300溶于2的二氯甲烷22溶液中形成油相，外水相为2聚乙烯醇溶液102。 　　将1倒入中，冰浴超声处理30得到初乳1，将初乳倒入2中，冰浴下高速匀浆30，得到12复乳。 　　将复乳倒入40010的去离子水氯化钠溶液中，室温下磁力搅拌机上海雷磁，1700搅拌2，前30冰浴，后15常温下搅拌，再800搅拌2挥发残余有机溶剂，收集微球，去离子水洗涤3次，真空冻干，得微球2058，置于4℃保存。 　　2聚合物合金法采用乳化-溶剂挥发法与聚合物合金法结合制备微球，分为两步。 　　①微粉化。 　　经纯化的溶液300μ，与牛血清白蛋白溶液05含10混合后进行冻干处理，预冻温度－50℃，降温速度20℃，冻干条件－20℃，3;20℃，12。 　　混合物冻干后得到均匀分散在基质中的药粉。 　　②微囊化。 　　∶=1∶3300置于试管内，加入所制冻干粉，加入2的22使聚合物溶解形成油相。 　　水相为2聚乙烯醇溶液10。 　　将加入中，高速匀浆30，形成乳液，复乳倒入40010的去离子水氯化钠溶液中，室温下磁力搅拌，方法同上，得微球2567，置于4℃保存。 　　2．微球形态及粒径的检测取少量-缓释微球放置于贴有双面胶的金属板上，喷金制成扫描电镜标本，扫描电镜下观察其外形。 　　取少量缓释微球溶解于去离子水，在光学显微镜下用测微尺测定200个微球的粒径，每隔5μ粒径为一单元，分别计数每一单元的微球数。 　　以微球个数的百分数为纵坐标、粒径大小为横坐标μ，绘制微球粒径分布的直方图，测定微球的平均直径及粒径分布。 　　3．微球包封率的测定1建立标准曲线将-检测试剂盒中的标准品稀释为10、20、40、80、160、320的溶液，以不含的空白微球降解液作为空白对照，将酶标仪吸光度调零，绘制标准曲线。 　　2萃取法提取微球中的分别取10缓释微球溶于05的乙酸乙酯中，然后加入2的去离子水，在振荡器上充分混匀，萃取乙酸乙酯中的，静置，分取水层，重复3次。 　　合并三次提取液，混匀。 　　3微球萃取率的测定取10不含的微球和标准品1μ溶于05的乙酸乙酯中，然后加入2的去离子水，在振荡器上充分混匀，萃取乙酸乙酯中的，静置，分取水层，重复3次，合并三次提取液，混匀。 　　用法在450波长下测定所得溶液的吸光度值，计算含量，算得萃取率。 　　4微球包封率的测定将步骤2中萃取液稀释，用法检测范围10～400在450波长下测定所得溶液的吸光度，以空白微球降解液作为空白对照。 　　计算微球中的含量，严格按照说明书操作。 　　微球包封率按以下公式计算微球中测定的量=微球质量×4中测得微球中浓度;微球中理论量=投入的的质量;微球包封率=微球中测定的量微球中理论量×100。 　　4．微球的体外释放准确称取两种微球各3份，50微球分别溶于5磷酸盐缓冲液中74，37℃震荡温浴，分别在6、12、1、4、7、14、21、30、40、50、60、70、80、90取出全部稀释液2000，2，并补充相应的缓冲液，取出液－20℃保存，每个样品按1∶100和1∶1000稀释，每个浓度的稀释样品做双复孔，测定浓度，计算每次释药量及累积释药率，并绘制释放曲线。 　　5．微球中活性的检测［6-7］分别于1、7、30、60、90时取微球释放液，通过对12细胞突起的计数来检测的活性。 　　将生长良好的12细胞接种于预先经鼠尾胶原包被的6孔培养板中，接种密度为2×1042，每孔加入2含体积分数为10马血清和体积分数为5胎牛血清的培养基，在37℃、体积分数为52及饱和湿度条件下培养3后随机分组，分为组阳性对照组、不含的牛血清白蛋白微球组阴性对照组、传统复乳法制备的微球组复乳法组、合金法制备的微球组合金法组。 　　分别以50的、牛血清白蛋白微球的缓释液、传统复乳法所制备微球的缓释液、合金法制备的微球缓释液各2替换原细胞培养液，继续培养48后，在倒置显微镜上用随机选取视野，计数100个细胞，并计算每组中长出轴突的细胞阳性细胞比例，阳性细胞比例=阳性细胞数计数细胞数，每组实验重复3次。 　　数据均以均数±标准差珋±表示，采用统计软件对数据进行均数检验。 　　＜005为差异有统计学意义。 　　结果一、缓释微球表观形态观察结果光镜、扫描电镜结果显示两种方法制备的微球均具有光滑的表面且形态规整均匀，近似圆形，大小相近，体外中释放90后其表面存在大量孔隙，部分降解，见图1，2。 　　二、微球粒径测定结果两种方法制备的微球粒径分布经软件正态性检验均符合