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产前诊断技术及羊水、绒毛细胞培养;产前诊断的定义;无创性检查 ;基于新一代测序技术的非侵入性产前染色体非整倍体综合征检测技术;无创产前检测指征 ;有创产前诊断;有创产前诊断
1.绒毛膜穿刺（ 孕10周-13周+6）
2.羊膜腔穿刺（孕16周-22周+6）
3. 脐静脉穿刺（18周之后）
4. 胎儿镜检查（根据检查目的确定检查时间）
;有创产前诊断指征
; 羊膜腔穿刺（ amniocentesis）
羊水细胞主要来自胎儿的皮肤、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道或羊膜内层（表皮细胞、羊膜细胞、未分化细胞、吞噬细胞等），可用于核型分析、DNA诊断,羊水则可用于生化分析。
;人羊水细胞培养及染色体制备 ;
E细胞：呈致密生长，细胞集落边界清晰，在胰酶消化的连续培养中不再生长，仅在原代培养时可见到，生长期最短。
AF细胞：呈鸟眼状，不同的孕妇的羊水中细胞体积可变化。
F细胞：呈梭型，生长期最长，细胞分裂旺盛，在较老的羊水培养物中占优势。;细胞接种; 一般5-6天后镜下观察，可见成纤维样或上皮样细胞生长，当细胞生长旺盛，在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞时，视情况换液，继续培养24-48小时，如细胞生长状况好，细胞密度适中，即可加入秋水仙素0.04ug-0.08ug/ml(20ug/ ml) ，4-6小时左右行细胞学处理。;细胞收获
吸出瓶中细胞液入10ml离心管，生理盐水冲洗细胞壁两遍；
0.25% EDTA-trypsin消化3-5分钟，待细胞面出现肉眼可见皱形改变时即用吸管吹打细胞，直至全部脱落；
收集细胞悬液：1500rpm，室温离心10min，去上清；;低渗：加入0.075M KCl 6ml-7ml，吸管吹打，37℃水浴5min-10min;
预固定：加入1.5ml左右3:1固定液，轻混匀,37℃水浴5min,1500rpm,室温离心10min；
固定：加入3:1固定剂8ml左右，轻混匀，37℃水浴10min；
1500rpm,室温离心10min ，去上清，约留0.5ml；
重复固定：同上；
;1500rpm，室温离心10min，去上清；
调悬液：视管底细胞量加入几滴新鲜固定剂，并吹打混匀;
滴片：每片1-2滴, 滴片4-6张;
烤片：75℃烤箱烘烤3小时;
第二天行显带处理：同外周血。
;注意事项 ;;绒毛膜穿刺;绒毛活检量
不同诊断目的所需的绒毛量不同，染色体分析约需绒??10mg，DNA分析5mg即可,生化测定仅需3～5mg。故一次绒毛活检获取20mg左右的绒毛组织可满足任何产前诊断的需要。;优点
1、早期诊断，减轻孕妇及家人的心理压力；
2、取材简便易行；
3、培养方法及条件成熟，易掌握。;缺点
1、有2%的绒毛样本由于染色体嵌合，结果不能判断，需进一步行羊膜腔穿刺确定是否有染色体异常；
2、并发症多：流产、出血、 宫内感染、刺破胎膜、胎儿肢体发育缺陷。
;绒毛细胞培养与染色体制备方法;接种;;;;细胞培养 ;注意事项
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