家族性高胆固醇血症病人低密度脂蛋白受体功能的分析及基因突变的检测-病理生理学专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文摘 南京医科大学硕士学位论文 摘 要 目的 家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia， FHl是由低密度脂蛋白(10w density lipoprotein，LDL)受 体基因缺陷引起的一种常染色体显性遗传疾病。纯合子FH病 人中有很多在十几岁到二十几岁时就会发生很严重的心血管事 件：杂合子FH病人患心肌梗死的机会较同龄的正常人也高得 多。但到目前为止，尚未建立完善的诊断方法。本研究旨在通 过LDL受体功能分析及LDL受体基因检测来达到确诊FH的 目的。／方法分离FH患者外周血淋巴细胞，利用流式细胞仪 观察淋巴细胞结合和摄取DiI．LDL的情况。抽提FH患者外 周血基因组DNA，进行聚合酶链反应．单链构象多态性分析 (PCR．SSCP)及DNA序列分析。结果共对4个FH家系外 周血淋巴细胞的LDL受体功能进行了分析，发现均表现为 LDL摄取障碍。对一家两例l陆床诊断为FH纯合子的惠儿及 其父母从基因水平进行了进一步研究，发现LDL受体基因突 变是位于第6外显子的移框突变，导致终止密码子TGA的提 前出现，从而不能表达正常的LDL．R，体内胆固醇的代谢发 生障碍．y结论FCM检测外周血淋巴细胞表面LDL受体活性 的方法与常规方法相比，具有快速、简便、损伤小等特点，且 可以预知大致的基因突变类型。PCR．SSCP分析技术检测灵 敏度高，可用于检测单碱基置换、数碱基插入或缺失等基因变 异，是检测LDL受体基因突变的有效手段。上述两种方法的 合理配置可用于大规模人群筛查，并可能发现地方性常见的 LDL受体基因突变类型，从而有助于建立简便的FH基因诊 断方法。 ／ ＼／ 、 ／ ，， 关键词：家族性高胆固醇血症，LDL受诛，淋巴菊胞，聚合 酶链反应．单链构象多态性分析，基因突变 南京医科大学硕士掌住论叉ABSTRACT 南京医科大学硕士掌住论叉 ABSTRACT OBJECTIVE：Familial hypercholesterolemia(FH)，caused by various different mutations in the low density lipoprotein(LDL)gene， invariably lcads to severe premature coronary heart disease． Heterozygous FH patients are less severely affected but are still at increased risk of CHD．The aim of our research iS to analyze the LDL receptor function and gene mutation in FH patients and open an avenue of definite diagnosis toward FH．METHODS：Lymphocytes were isolated from 1 0ml anticoagulated peripheral blood，then a flow-cytometric method(FCM)with DiI—LDL was used to identify the function of LDL receptor on the surface of lymphocytes． Genomic DNA was isolated from whole blood of FH patients．then analyzed by PCR—SSCP and nucleotide sequencing methods． RESULTS：DefeCtS of internalization of LDL receptors were identified bv FCM in all 8 FH patients examined in the present study 2 FH patients in one family and their parents were analyzed genetically．The detected mutation was a deletion of A，which caused a frameshifi in codon 297 of exon 6 and introduced a beforehand stop codon．CONCLUSION：Examining the activity of LDL receptor on the peripheral lymphocytes is an effective artific