急性白血病凋亡因子及多药耐药的实验和临床研究-内科血液学专业论文.docxVIP

墨丝鱼垒塑塑圭里王墨童垫塑壅塑壅堕塑!堕塞塑塞————————————————』L——垩一急性白血病凋亡因子及多药耐药的实验和临床研究 墨丝鱼垒塑塑圭里王墨童垫塑壅塑壅堕塑!堕塞塑塞————————————————』L——垩一 急性白血病凋亡因子及多药耐药的实验和临床研究 导 师 夏学鸣 博士生 朱兴虎 中文摘要 目前化学治疗仍是临床治疗自血病的主要手段，也是造血干细 胞移植的基础。近年来，尽管有多种新的药物和治疗方案推出，但大 多数急性白血病(AL)患者最终因治疗失败而死亡，导致治疗失败的原 因是多方面的，其中多药耐药(MDg)是最重要的一种。多种机制可导 致MDR，涉及P一糖蛋白(P—gP)和多药耐药相关蛋白(MRP)的药 物泵出、肺耐药蛋白(LRP)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的药物转 运、细胞凋亡受抑以及酶解毒增强等。为较全面地了解AL患者体内 的耐药蛋白和凋亡调节蛋白的表达、及其与临床生物学特性和预后的 关系，为白血病患者的个体化治疗提供依据，从而提高白血病的疗效， 我们进行了以匍研究。 ／HL一60／VCR多药耐药细胞株是研究获得性耐药的一种工具，以 往认为其耐药机制是P．gp过度表达。我们采用流式细胞术分别检测 了药物敏感细胞株HL．60和多药耐药细胞株HL．60／vCR细胞的耐药 蛋自P-gp、MRP、LRP、BCRP、谷胱甘肽．S．转移酶。Ⅱ(GST-Ⅱ)以 及凋亡调节蛋白bcl．2、bax、bad、bcl—X的表达，结果发现在HL一60～CR 细胞中，耐药蛋白P．gP、MRP、BCRP、GST-丌分别是HL．60细胞 株的18．62、1．19、1．5、1．32倍，而LRP无变化。抑凋亡蛋白bcl．2、 bcl—X分别是其在HL一60细胞株的2．48、1．25倍，调节蛋白bad是HL．60 细胞株的1．08倍，而促凋亡蛋白bax反而降低，是HL．60的O．88倍， 说明在I-IL-60／VCR的多药耐药机制中，不但耐药蛋白P-gp、MRP、 BCRP、GST．氕的表达增强，而且凋亡调节蛋白bcl．2、bax、bcl-X、 bad也参与HL60／VCR耐药机制的形成，提示细胞获得性耐药有多种 耐药机制参与。 国内已有采用免疫组化或RT-PCR方法对自血病细胞的bcl-2、bax 急性白血病凋亡因子及多药耐药的实验和临床研究 急性白血病凋亡因子及多药耐药的实验和临床研究 塑 薹 研究，但这些方法难以定量。本研究应用流式细胞术对64例初治AL 患者细胞bcl．2、bcl．X、bax、bad的表达进行研究，结果显示：bcl-2 在急性髓细胞白血病(AML)的表达较急性淋巴细胞白血病(ALL) 低(PO．05)；在AML的各亚型中，bcl．2由高到低依次为M1、M4、 M5、M6、M2和M3，后二者分别同前者相比有显著差异(P0．05)。 bax在M4中表达较高，与其他类型相比有明显差异(P0．05)。bcl． x由高到低依次为M1、M2、M5、M3、M4，前三者分别明显高于 后二者(P0．05)。bcl．2、bcl．X、bax及bad的表达在临床耐药组和 缓解组无显著意义，而bcl．2／bax的比值在耐药组明显高于缓解组， 二者相比有统计学意义(P0．05)，根据bcl．2／bax的比值的大小将AML 分成高危组和低危组：高危组的缓解率为48％，低危组的缓解率为 78．2％，两组有显著性差异(P0．05)，提示bcl．2／bax的比值影响患 者对化疗的敏感性，是一个独立的预后因素。bcl．2／bax比值与bcbX 均高的患者，缓解率为33．3％，较单独bcl．2／bax比值高患者的56．1％ 低，表明bcl．X可使细胞凋亡受抑增加而使白血病患者细胞的耐药性 增强。 我们进一步探讨了bcl．2／bax高比值(≥3．73)与FAB分型、免 疫表型及细胞遗传学特征在初治成人AML的关系，结果显示：以 M4最高(80％)，其次为M5(61．5％)、M1(50％)和M2(38．8％)， 而M3亚型最低，仅占14．3％，M6病例少，有待观察。bel．2／bax高 比值与CD34表型高度相关(PO．05)，与CD2、CD7、CDl3、CDl4、 CDl9和CD33等表面标志无关(P0．05)。bd．2／bax高比值在预后 差染色体核型组占62．5％，高于中等预后组的57．1％和预后好核型组 的26．3％。提示这些预后因素可通过bcl．2家族调节蛋白来影响化疗 的敏感性。 国内外有关白血病耐药在临床方面的报道，仅少数同时采用多 种耐药因素研究，且多采用免疫组化或RT-PCR方法。根据流式细 胞仪具有快速、敏感、精确和定量的特点，我们采用流式细胞术对64 例初发AL患者进行了P-gp、LRP、GST．Ⅱ、MRP和bel-2／bax多