临床常见病原体检查课件.ppt

第九章 临床病原体检测;提 纲;教学目的与要求：;重点与难点;提 纲;临床细菌学检验的特殊性;基本原则 1：正确的标本类型和采集部位以反映有效病程 2：采集和运送应无菌操作，避免污染 3：尽快送检 4：视所有标本为传染品，高度污染标本要有明显标识 5：注意生物安全，标本用后要做消毒处理 ;（一）血液标本的采集;（二）尿液标本的采集;（三）粪便标本采集;（四）呼吸道标本采集;（五）脑脊液与其它无菌体液采集;（六）眼、耳标本采集;（七）泌尿生殖道标本采集;（八）创伤、组织和脓肿标本;标本送检;二、标本的实验室质量评估标准;三、检查方法;（一）直接显微镜检查——不染色标本;（一）直接显微镜检查——染色标本;革兰染色;;墨汁染色;抗酸染色;荧光显微镜用于标本经荧光染色 后直接检出某些病原微生物;SARS（severe acute respiratory syndrome ）病原体的确定。;电子显微镜发现为某种冠状病毒;;意义;(二)病原体特异性抗原检查 ;O1群霍乱弧菌的血清分型;（三）病原体核酸的检测;;基因组DNA;;;;;;;;;;PCR扩增产物电泳;;PCR技术的特点;2 ）特异性;PCR的类型和应用;（三）病原体核酸的检测——PCR;（三）病原体核酸的检测——Realtime PCR;（三）病原体核酸的检测——Realtime PCR;将大量核酸片段(寡核苷酸、PNA、cDNA、基因组DNA)以预先设计的方式固定在载玻片、尼龙膜和纤维素膜等载体上组成密集分子阵列，与荧光素或其他方式标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的有无和数量。该技术具有高通量、自动化程度高、快速、样品用量少、灵敏度高、特异性强、污染少等特点。病原微生物的16S rDNA及23S rDNA序列近几年被作为一个较理想的基因分类靶序列，其在进化压力下保持了高度的保守性，同时又具有一定的变异性，基因芯片技术通常利用病原微生物的这一分子生物学特性，实现多样本多病原微生物的同时检测。;意义;（四）病原体的分离培养和鉴定;1.细菌感染性疾病病原体的分离培养 分离培养是微生物学检验中确诊的关键步骤 根据临床症状、体征和镜下检查特征做出病原学初步诊断，选择最合适的培养方法，主要是选择适当的培养基、接种前的标本处理和确定孵育条件，然后根据菌落性状(大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等)和细菌的形态、染色性，检测细菌生化反应结果和血清学实验、动物接种实验(白喉杆菌)，对分离菌作出鉴定，也可借助于微量鉴定系统快速简便鉴定分离菌 ;;2.不能人工培养的病原体感染性疾病 将标本接种易感动物、鸡胚或行细胞培养;病毒分离培养与鉴定的结果评价： 从组织、血液以及脑脊液中分离到病毒可明确诊断。 从呼吸道、肠道等分离到病毒，如该病毒人体不能长期携带，有诊断价值，如麻疹病毒、流感病毒等。反之需相应的临床表现，才有病原学意义，如巨细胞病毒，肠道病毒等。 阴性不能排除病毒感染。 必须结合流行病学资料、临床表现、标本来源及病毒种类加以分析。;（五）血清学试验; 双份血清检查：病程早期和晚期分别采血清2-3份检查，双份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考虑病原体感染 单份血清检查：特异性 IgM可作为感染性疾病的早期诊断指标，且可区分原发与复发感染。 方法有：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光、放射免疫、酶联免疫吸附试验。;适用范围;;抗原结构;血清学诊断－－肥达反应;几种沙门菌抗原构造;肠热症病人血清抗体出现情况;肥达反应正常值;O与H抗体的诊断意义：;生理盐水;伤寒带菌者的检测;第二节：病原体耐药性检测;第二节：病原体耐药性检测;抗生素压力;体外抗菌药物敏感试验的目的;;体外抗菌药物敏感试验的方法; 原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。;试验程序;;;细菌药敏试验-液体稀释法;移液管2;培养;结果判读;细菌药敏试验- E-test法;细菌药敏试验- E-test法;缺点;药敏试验结果的解释（1）;药敏试验结果的解释（2）;（二）特殊的耐药菌监测的特殊试验;1.耐甲氧西林葡萄球菌的筛选测定（methecillin resistance staphylococcus，MRS）;1.耐甲氧西林葡萄球菌的筛选测定（methecillin resistance staphylococcus，MRS）;临床意义;2.氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌的筛选测定;2.氨基糖苷类抗生素高耐药肠球菌的筛选测定;临床意义;3.耐青霉素肺