SDS裂解液-联科生物.PDFVIP

Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: SDS 裂解液 I. 产品信息 目 录 号: WB024 规 格: 100ml 保 存: -20 ℃ 效 期: 一年 II. 产品简介 SDS 裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可 以用于常规的Western 、染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)等。SDS 裂解液裂解得到 的蛋白样品可用BCA 蛋白浓度测定试剂盒( 目录号PQ0011 或PQ0012)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度 的去污剂，不能用Bradford 法测定蛋白浓度。可参考“V.各种裂解液主要特点、差异和选择”选择合适的 裂解液。 本产品已添加sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA 和leupeptin 等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。如需添加PMSF ，请在临用前加入。 III.使用方法 对于培养细胞样品： 1. 融解SDS 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1 mM。 2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS 、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可 以不洗) 。按照6孔板每孔加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充 分接触。通常裂解液接触细胞1 - 2秒后，细胞就会被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10分钟。 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指将细胞弹散。按照6孔板每孔细胞加入150 - 250 μl裂解液的比例 加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多，须分装成50 - 100万细胞/管，然后再裂解。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大 裂解液的用量到200 μl或250 μl 。如果用于ChIP，建议6孔板每孔细胞至少加入200 μl裂解液。 对于组织样品： 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解SDS 裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1 mM。 3. 按照每20 mg组织加入150 - 250 μl裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解 液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。 4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。 5. 充分裂解后，10000 - 14000 g离心3 - 5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE 、Western和ChIP等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。 然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用 匀浆器那样裂解得比较充分。 Product For Research Use Only rev: 01/16 MultiSciences Biotech Co,. Ltd Technical Service: tech@ To place an order: service@ Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: IV. 注意事项 1. 请在使用本产品前仔细阅读说明书。本产品仅用于科研，不可用于诊断。 2. 为了您的安全和健康，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。 3. 为达到最佳的裂解效果，尽量避免过多的反复冻融。可适当分装后使用。 4. 需自备PM