细胞工程-第四章节细胞培养1011资料.pptVIP

4.3.1. 原代细胞培养 是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制、以及细胞的衰老，死亡等生命现象。 最接近和反应体内生长特性 Step 2 将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔 Step 3 用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪， Step 4 剪碎组织 Step5 接种组织块 移入培养箱中（注意贴有组织块的一面朝上）， 观察 24～48小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已被污染； 若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液pH过高； 若培养液显为橙黄、橘红且清澈，一般显示细胞生长良好。在相差显微镜下观察，若此时见细胞自组织边缘长出。 继续培养3～5日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养3～4天，细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养。 细胞冻存和复苏 细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、经费，减少污染，减少细胞生物学特性变化。 冻存 当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。 应用低温保护剂和改进冻融方法 低温保护剂的应用 在细胞冻存时加入温保护剂，能大大提高冻