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2000级中国中医研究院中药所硕士学位论文
2000级中国中医研究院中药所硕士学位论文 中文摘要
中文摘要
菌血症和内毒素血症是革兰氏阴性败血症病人的两大致死状态。强力、 高效的抗生素虽能有效地控制菌血症,但是病人的死亡率仍然很高,其原因 可能与抗生素在杀死细菌的同时诱导细菌释放内毒素(LPs),引起或加重内毒 素血症有关。因此,在应用抗菌素治疗的同时,应用其它具有中和内毒素的 药物,将会改善病人的预后。
LPs通过激活巨噬细胞及血管内皮细胞而产生一系列的细胞因子,如肿 瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素一6(IL一6)等,从而引起或加重内毒素休克乃至 死亡。另外,当LPs激活巨噬细胞时,被活化的巨噬细胞产生分泌一氧化氮 (N0),并可形成OH00一,从而引起组织细胞损害。
头孢他啶(cAz)是临床上常用的一种p一内酰胺类抗菌素。有研究发现, cAz与革兰氏阴性细菌共同培养时,可引起大量的LPs释放到培养上清液中, 该上清液可刺激巨噬细胞释放大量的炎性因子,造成严重的炎症反应。LPs 是具有多价阴离子特性的大分子物质,有些阳离子多肽能与之结合,并降低 其毒性”5。5”。鸡蛋清原名鸡子白,首载于《神农本草经集注》。鸡蛋清具有润 肺利咽,清热解毒的功能。鸡蛋清中含有一种多肤成分一溶菌酶(Bgg white Lysozyme,E¨LzM),近年研究发现,Ew_LzM是一种富含阳离子的蛋白质, 这种蛋白质与B一内酰胺类抗生素联合应用于大肠埃希氏菌培养时,Ew—LzM 对cAz诱导的大肠埃希氏菌LPs释放有抑制作用,从而降低其培养上清液对巨 噬细胞昀激活,减少炎性因子的释放,减轻炎症反应。表明EW—LzM可能有 中和LPs的作用。
福氏志贺氏菌是肠杆菌中一种最常见的病原菌,有强烈的内毒素,引起 人类的细菌性痢疾。在婴幼儿可引起急性中毒性痢疾,死亡率较高。临床上, 细菌性痢疾,尤其是中毒性痢疾可能会因为细菌释放内毒素入血而引起较严 重的毒血症。如果用Ew—LzM与抗菌素联合使用,即能控制菌血症,又能抑制 内毒素释放,则可能会改善病人预后,这将在治疗上具有较大的意义。为此
2000级中周中医研究院中药所硕士学位论文
2000级中周中医研究院中药所硕士学位论文 中文摘要
本课题将通过体外及动物体内实验研究Ew—LzM对cAz诱导的福氏志贺氏菌内 毒素(LPs)及其致炎活性物质释放的影响;并通过细菌形态学及分子生物学实 验探讨Ew—LzM抑制cAz诱导的LPs释放及致炎症反应的机理。通过抗原性实 验探讨Ew—LzM在动物体内的给药途径。为Ew—LzM的研究开发提供理论依据。
1.体外研究 采用系列稀释法测定cAz对福氏志贺氏菌的最低抑菌浓度(MIc)。采用
肉汤和稀释的兔血液培养系统,取100 u l细菌母液加入到含或不合Ew—LzM 的营养肉汤和稀释的兔血液中,于37℃水浴中震荡培养一段时间,在细菌指 数生长期向各试管中加入cAz,继续培养一定时闽,终止培养。将细菌悬液 做系列稀释,采用营养琼脂平板接种,计数各培养管中存活的细菌数,探讨 cAz单独或与Ew_LzM联合应用对细菌活性的影响。将上述细菌悬液离心收集 上清液,储存于一20℃备用。将细菌上清液作适当稀释后,用偶氮显色法测定 释放到上清液中的LPs浓度,探讨联合用药时E¨LzM对cAz诱导的LPs释放 的影响。将细菌培养上清液加入到培养好的巨噬细胞中。用ELIsA法和染料 摄入法测定其对巨噬细胞炎性因子T龋a的诱生能力。用Griess试剂测定其 对巨噬细胞炎性因子No的诱生能力。探讨E耻LzM与cAz联合用药组的细菌 培养上清液对巨噬细胞中炎性因子的诱生能力。
结果表明:cAz对福氏志贺氏菌的MIc为3.12mg/L。营养肉汤培养系统 中cAz(5 0、】OOmg/L)单独应用可迅速杀死细菌;Ew—LzM单独应用对细菌生长 无明显影响;而Ew.LzM与cAz联合使用保持了与cAz单独用药相当的杀菌作 用,菌落计数结果与cAz单独用药组相近。在稀释的兔血液培养液中,cAz(50、 100mg/L)单独用药组对福氏志贺氏菌有较强的杀菌作用(P(o.01),但较在肉 汤中弱,联合用药较cAz单独用药有更强的杀菌作用(Po.01)。在营养肉汤 和稀释的兔血液培养液中,cAz(25、50、100mg/L)单独处理组均可造成细菌 迅速溶解,导致大量的LPs释放到培养上渍液中,与无处理对照组比较 PO.01,其细菌上清液在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的炎性因子如肿 瘤坏死因子(TNF o【)、一氧化氮(N0)产生,与无处理对照组比较PO.
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