活体多层次光学成像研究炎症反应中固有免疫细胞的运动特征分析-生物医学工程专业论文.docx

万方数据 万方数据 A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Doctor of Philosophy in Science In vivo multi-scale optical imaging the migration characteristics of innate immune cells during the inflammatory response Ph.D.Candidate : Meijie Luo Major : Biomedical Engineering Supervisor : Zhihong Zhang Huazhong University of Science and Technology Wuhan, Hubei 430074, P. R. China December, 2014 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进 行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□， 在 年解密后适用本授权书。 不保密□。 （请在以上方框内打“√”） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 摘 要 HYPERLINK \l _bookmark1 * 物理创伤、化学损伤和病原物侵袭均能够引发机体的炎症反应。光学成像技术 已逐渐用于炎症反应的活体研究。光学成像技术具有高时空分辨率的特点，可以直 观可视化地研究炎症微环境中免疫细胞的聚集、吞噬、凋亡及细胞接触等过程。中 性粒细胞、单核巨噬细胞（MMs）和树突细胞（DC）等免疫细胞在炎症反应中发挥 重要的抗原吞噬和抗原提呈作用，但是，这些免疫细胞在炎症反应中的运动行为特 征仍不完全清楚，尤其缺乏同时对多种免疫细胞进行长时程活体非侵入式监测所获 得的时空动态信息。因此，本研究利用足垫和淋巴结外植体成像模型，对中性粒细 胞、MMs 细胞和 DC 细胞在卵清蛋白（OVA）诱导的迟发型超敏反应（DTH）和细 菌炎症反应中的时空动态运动行为特征进行了阐释。本研究一方面从运动学角度深 入了解了免疫细胞在炎症反应中的功能，另一方面从免疫细胞运动的角度展示了雷 帕霉素（Rapamycin/RAPA）在抗炎作用中的免疫抑制效应。 主要结果如下： 1）建立了用于研究炎症反应中免疫细胞运动行为特征的活体多层次光学成像方 法。运用整体荧光成像技术动态监测免疫细胞的聚集，采用大视野扫描显微成像技 术研究免疫细胞的动态分布，同时通过共聚焦时实扫描成像来获得免疫细胞的动态 信息。 2）运用活体光学成像技术研究了雷帕霉素对 DTH 的免疫抑制效果。结果显示， 在炎症反应的触发阶段，中性粒细胞和 MMs 细胞在抗原刺激后的 24 h 明显聚集。 雷帕霉素给药处理的炎症反应中，抗原刺激后 4 h 雷帕霉素促进了中性粒细胞的聚集 并增加了血管的通透性；抗原刺激后 48 h 中性粒细胞在炎症部位的聚集明显受到抑 制（抑制率 50％），同时推迟了 MMs 细胞在炎症部位的募集。雷帕霉素处理的炎 症反应中，抗原刺激后 4 h 免疫细胞的运动特征同其在 DTH 反应抗原刺激后 24 h *基金资助：国家重大科学研究计划项目（2011CB910401），国家自然科学基金委员会创新研究 群体科 学基金 （），国家 自然 科学基 金 项目（），国 家 科技支 撑计划 （2012BAI23B02）。 I II万方数据 II 万方数据 的运动特征类似，这些运动参数包括免疫细胞的平均运动速度、滞留时间、平均位 移和限制性系数等。结合对细胞因子的检测结果，可以推测雷帕霉素缩短了 DTH 反 应的准备阶段，同时减弱了反应期的反应强度，这一过程可能涉及 T 辅助 2 型细胞 （Th2）或调节性 T 细胞（Treg）。 3）研究了雷帕霉素对 DC 表型和功能的调节作用。研究结果表