激光捕获显微切割纯化的人正常支气管上皮与肺鳞癌组织的定量蛋白质组学研究-病理与病理生理学专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特IIjII以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。 作者签名： 聋垦 日期： 型年立月旦日 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 作者签名： 聋堑 导师签名 日期：翌!年互月坐日 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 摘要 背景：肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率位居人类恶 性肿瘤前列。肺癌一般发病隐匿，早期症状不明显易被忽视，多数患 者首次就诊时已发生癌细胞的侵袭或转移。应用蛋白质组学技术研究 肺癌的发生发展浸润过程，分析其蛋白质种类、表达及修饰情况，有 可能识别癌变相关蛋白质，探讨其癌变的分子机理，为鉴定肺癌癌变 相关蛋白奠定基础，尤其是寻找早期阻断癌变的靶蛋白，是提高肿瘤 患者治愈率与生存率的行之有效的手段，对于肺癌的早期诊断和治疗 具有重要的意义。 方法：采用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)和二维液相色谱一串联质谱技术 (2D．LC／Q．STAR)分离和鉴定人肺鳞癌组织(human lung squamous carcinoma，HLSC)与人正常支气管上皮组织(normal human bronchial epithelium，minE)的差异表达蛋白质。Westem blot验证差异蛋白质 CKB、HSP27、SCCAl、S100A8以及S100A9在HLSC和NHBE中 的表达水平，采用组织芯片技术(tissue microarray)检测差异蛋白 SCCAl、S100A8、S100A9在100例肺癌组织标本中的表达水平。采 用脂质体转染方法将CKB表达质粒及空白载体分别转染肺鳞癌细胞 NCI．H520，建立稳定转染细胞系。MTT、流式细胞术检测CKB对肺 鳞癌细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期分布的影响。 结果：(1)建立了HLSC和NHBE的差异蛋白表达谱，识别并鉴 定96个差异表达的蛋白质点，其中在HLSC中上调的蛋白49个，下 硕士学位论文 硕士学位论文 中文摘要 调蛋白47个，差异蛋白以胞浆蛋白为主，其次是核蛋白、分泌蛋白 和线粒体蛋白等，功能涉及细胞粘附、增殖、代谢和信号转导等。(2) Western blot验证HSPBl、S100A8、S100A9在HLSC中上调，CKB、 SCCAl在HLSC中下调；组织芯片验证S100A8、S100A9在HLSC 中上调，SCCAl在HLSC中下调。(3)同时Western blot结果显示CKB 蛋白在NCI．H520细胞中的表达低于HBE细胞，建立了稳定表达CKB 蛋白的NCI．H520细胞系；(4)细胞生物学实验结果显示CKB导致 NCI．H520细胞Go／Gl期阻滞，抑制细胞增殖，凋亡细胞数增加。 结论：本研究采用定量蛋白质组学技术筛选并鉴定了96个差异 表达的蛋白质点，癌中上调49个，下调47个。其中CKB、HSPBl、 SCCAl、S 100A8、S 100A9在肺鳞癌中的差异表达用Western blot及 组织芯片验证，CKB细胞生物学实验提示抑制细胞增殖，促进凋亡， 为肺鳞癌的癌变分子机制的进一步研究提供实验依据。 关键词肺鳞癌，激光捕获显微切割，定量蛋白质组学，iTRAQ， 组织芯片 II 硕士学位论文