大肠杆菌-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

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生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2008, 35(8): 954~963 肠杆菌(Escherichia coli)体外脂肪酸 合成反应的重建* ** ** *** 赛祥 朱 磊 罗 彪 孙益嵘 王海洪 (华南农业大学生命科学学院,广州5 10642) 摘要 PCR 扩增大肠杆菌参与脂肪酸合成的7 个主要酶基因: 、 、 、 、 、 和 ,并构建相应的 f abD f abG f abH f abA f abZ f abB f abI 表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3) 中分别诱导表达酶蛋白,并使用Ni-NTA 琼脂糖纯化到7 种酶蛋白 体外添加所需酶蛋白 14 和辅因子,在不使用[2- C]丙二酸单酰CoA 的条件下,成功地实现了脂肪酸合成反应的重建,另外还建立了数个鉴定有关酶 蛋白功能的标准反应,并用其鉴定了丙酮丁醇梭菌FabZ 的功能 关键词 细菌脂肪酸合成,脂酰ACP ,非变性聚丙烯酰胺凝胶 学科分类号 Q93 细菌的脂肪酸合成酶属于 型脂肪酸合成酶 有多种酶催化,依次进行 每一次循环脂酰碳链增 系,即脂肪酸的合成以ACP(acyl carrier protein) 为 加两个CH2 基团,直到形成棕榈脂酰ACP 循环 载体,每一步生化反应均由独立的酶催化,与高等 反应首先由NADPH 依赖的 - 酮脂酰ACP 还原酶 茁 哺乳动物拥有的 型脂肪酸合成酶系有本质的差 (FabG)催化 - 酮脂酰ACP 还原,生成 - 羟脂酰 玉 茁 茁 别[1~3] 正是这一差别使得细菌脂肪酸合成酶系成 ACP 接着产物脱水,生成反-2- 烯酰ACP 这一 了当今新型抗菌药物筛选的靶位点之一[4, 5] 虽然 反应 - 羟脂酰ACP 脱水酶(FabZ 或FabA)催化 茁 细菌的脂肪酸合成体系高度保守,但是随着大量细 循环反应的最后一步是反-2- 烯酰ACP 还原,由 菌全基因组测序的完成,越来越多的基因注释表明 NADPH 依赖烯酰ACP 还原酶(FabI)催化,生成脂 细菌脂肪酸合成存在着广泛的多样性[2, 6] 目前在 酰ACP 接着开始下一循环,丙二酸单酰ACP 和 细菌中 经发现了4 种结构不同的烯脂酰ACP 还 脂酰ACP 在 - 酮脂酰ACP 合成酶 或 (FabB 或 茁 玉 [7~10] 原酶 和3 条不同的在厌氧条件下合成不饱和脂 FabF) 缩合成 - 酮脂酰 ACP,然后依次被还原 茁 肪酸的途径[11~13] 细菌特别是病原细菌脂肪酸合成 (FabG)、脱水(FabZ 或FabA)和再还原(FabI) 大肠 的多样性,为筛选专一性的抗菌药物提供了可 杆菌不饱和脂肪酸的合成是按以下方式进行:当脂 能[5, 14] 因此,研究细菌脂肪酸合成的多样性有着 酰链延伸至 10 个碳时,即形成 - 羟基癸脂酰

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