培养方式对真皮组织体外构建的影响.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（５）：７５～８０ 培养方式对真皮组织体外构建的影响  何燕娜　丁春梅　江　华　周　燕 　谭文松 （华东理工大学生物反应工程国家重点实验室　上海　２００２３７） 摘要　采用静态培养和转瓶培养方式分别构建真皮组织，考察培养方式和搅拌转速对细胞在三 维支架材料中增殖、代谢、分布的影响。结果表明，由转瓶培养方式构建的细胞－材料复合物，其 ６ ３ ６ 最终细胞密度和细胞比生长速率均明显高于静态培养（１４．２～２７．６×１０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ ｖｓ１０．１×１０ ３ －１ －１ ｃｅｌｌｓ／ｃｍ 和０．１４５～０．２６２ｄ ｖｓ０．１１１ｄ ），而转速达８０ｒ／ｍｉｎ的转瓶尤其突出；静态培养的细 胞 材料复合物内部细胞稀少，且分布不均匀，转瓶培养的细胞 材料复合物在材料表面和内部细 ? ? 胞密度都有所提高，分布情况也得到改善，且８０ｒ／ｍｉｎ转瓶培养的组织其细胞密度和分布均优于 １０ｒ／ｍｉｎ和４０ｒ／ｍｉｎ转瓶培养。转瓶培养在其转速达到一定强度时能明显提高细胞在支架中的 增殖速率，缩短培养时间，并有效改善细胞在支架内的分布，是一种理想的培养方式。 关键词　组织工程　真皮　转瓶培养 中图分类号　Ｑ８１３１ 　　自体皮肤移植是治疗皮肤创伤的传统方法，但自 　　本研究考察了传统的静态培养方式和转瓶培养方 体皮源不足是大面积创伤救治过程中的难题，组织工 式以及不同转速的转瓶培养对细胞在三维支架材料中 ［１］ 程皮肤的发展为解决这一难题提供了新的思路 ，其 增殖、代谢、分布的影响。通过对不同培养环境进行比 中组织工程真皮在工程化皮肤重建过程中发挥了重要 较，并利用ＦＬＵＥＮＴ软件计算转瓶中的流场速度分布， ［２］ 探讨传质对细胞和组织发育的影响，为将来真皮构建 的作用 。 　　在真皮组织体外构建中，传统的培养方式是采用 生物反应器的设计提供科学依据。 静态培养，但存在细胞密度低、分布不均匀等缺点，最 ［３］ １　材料与方法 终影响到整个组织的构建 。目前国内外关于动态培 养方式对组织构建的影响已经进行了广泛的研究，包 １．１　材　料 ［３，４］ ［３，５，６］ 　　胰蛋白酶、ＤＭＥＭ培养基购自Ｇｉｂｃｏ公司，新生牛 括转瓶 、灌注生物反应器 、旋转壁生物反应 ［７］ ［３］ 血清（ＮＢＳ）、壳聚糖 胶原海绵由实验室自制，葡萄糖试 器 、中空纤维生物反应器 培养等。由于动态培养 ? 方式引入了流体的流动，增强了物质传递，使组织的培 剂盒、氨试剂盒、ＭＴＴ试剂购自上海化学试剂公司，乳 养环境得以改善，促进了细胞的增殖速度和在支架中 酸试剂盒购自南京建成生物工程公司。 ［３～７］ １．２　人皮肤成纤维细胞培养 的均匀分布 。但此方面的研究主要集中于骨、软骨 组织的构建，同时对组织动态培养环境的量化分析文献 　　参照文献［１０］报道的方法，从小儿包皮的真皮层 报道得较少。在真皮组织体外构建中，也同样碰到了静 分离得到成纤维细胞，并进行传代培养，培养基为含有 态培养存在的物质传递限制的问题，因此提高支架材料