第六章 酶的非水相催化.pptVIP

Chapter 6 Enzymatic catalysis in Non-aqueous system 酶的非水相催化 酶的非水相催化 酶在非水介质中的催化作用称为酶的非水相催化（enzyme non-aqueous catalysis，enzyme catalysis in non-aqueous phase） 通过改变反应介质，影响酶的表面结构和活性中心，从而改进酶的催化活性。 Contents of chapter 6 6.1 酶催化反应的介质 酶非水相催化的几种类型 超临界流体 当一种物质处于其临界点以上的温度和压力之下，则称之为超临界流体。 6.2 有机介质中水和有机溶剂对酶催化反应的影响 6.2.1有机介质反应体系 非极性有机溶剂?酶悬浮体系(微水介质体系) 用非极性有机溶剂取代所有的大量水，使固体酶悬浮在有机相中。但仍然含有必需的结合水以保持酶的催化活性(含水量一般小于2%)。 酶的状态可以是结晶态、冻干状态、沉淀状态，或者吸附在固体载体表面上。 与水互溶的有机溶剂?水单相体系 有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系。酶、底物和产物都能溶解在这种体系中。 非极性有机溶剂?水两相/多相体系 由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶剂(高脂溶性)相所组成的两相体系。 正胶束体系和反胶束体系 6.2.2 反应体系中水对酶催化反应的影响 酶都溶于水，只有在一定量的水存在的条件下，酶分子才能进行催化反应。所以酶在有机介质中进行催化反应时，水是不可缺少的成分之一。有机介质中的水含量多少对酶的空间构象、酶的催化活性、酶的稳定性、酶的催化反应速度等都有密切关系，水还与酶催化作用的底物和反应产物的溶解度有关。 （1）水对酶分子空间构象的影响：酶分子只有在空间构象完整的状态下，才具有催化功能。在无水的条件下，酶的空间构象被破坏，酶将变性失活。故此，酶分子需要一层水化层，以维持其完整的空间构象。维持酶分子完整的空间构象所必需的最低水量称为必需水（essential water）。 为了维持其空间构象而进行正常的催化反应，不同的酶所要求的必需水差别很大。例如：脂肪酶只需要几个分子的水；凝乳蛋白酶分子在辛烷中需50分子的水，在其它溶剂中需要更少的水，而多酚氧化酶则需要350个水分子的水，才能显示其催化活性。 （2）水对酶催化速度的影响 与酶分子表面紧密结合的一单层水分子，对酶的催化活性是至关重要的。 图1表示猪胰脂肪酶催化甘油三丁酸酯和正庚醇的转酯化反应速度与有机介质中含水量的关系。 有机介质中水的含量对酶催化反应速度有显著的影响，在含水量较低的条件下，酶的催化反应速度随水含量的增加而升高，在催化反应速度达到最高时的含水量称为最适含水量。 最适含水量，包括酶分子水合的必需水，有机介质水合，固定化酶载体水合等所需的水量。因此，即使采用相同的酶，催化同一种反应，反应体系的最适含水量也会随着有机溶剂的种类，固定化酶载体的特性等变化而有所差别。 在实际工作中，应根据实际情况，通过实验确定最适含水量。溶剂的极性越强，最适含水量越高。如胰凝乳蛋白酶在二异丙醚、二氯乙烷或氯仿中最适含水量为1%；在极性较弱的甲苯中，只要0.5%的含水量就可达到最大酶活力；而在极性较强的乙酸乙酯中则要求较高的含水量。人们认为，酶要与有机溶剂互相争夺水分子，各自维持必要的水合状态。实验表明，有时太多的水会使酶的活性降低。其中一个原因是，水分子在活性位点之间形成水束，通过介电屏蔽作用，掩盖了活性位点的极性；另一个原因是，太多的水（在有机相中）会使酶积聚成团，导致疏水底物较难进入酶的活性部位，引起传质阻力。还有一种说法是，有机溶液中酶含水量低于最适含水量时，酶构象过于刚性而失去催化活性；含水量高于最适含水量时，酶结构的柔性过大，酶的构象将向疏水环境下热力学稳定的状态变化，引起酶结构的改变和失活。只有在最适水量时蛋白质结构的动力学刚性和热力学稳定性之间达到最佳平衡点，酶表现出最大活力。有些膜酶在水溶液中反而不稳定。 6.2.3 反应体系中有机溶剂对酶催化反应的影响1．有机溶剂对酶结构和功能的影响 常用的有机溶剂有辛烷，正己烷，苯，吡啶，季丁醇，丙醇，乙腈，已酯，二氯甲烷等。但并非所有的酶悬浮于任何有机溶剂中都能维持其天然构象、保持酶活性。 在水溶液中，酶分子均一地溶解于水溶液中，可以较好地保持其完整的空间结构。在有机溶剂中，酶分子不能直接溶解，而是悬浮在溶剂中进行催化反应。 根据酶分子的特性和有机溶剂的特性的不同，保持其空间结构完整性的情况也有所差别。 （1）有一些酶在有机溶剂的作用下，其空间结构会受到某些破坏，从而使酶的催化活性受到影响甚至引起酶的变性失活。例如，碱性磷酸酶冻干粉悬浮于乙腈中24小时，60%的酶将不可逆地变性失活；（