梳理基因工程的基本操作程序.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 1.作用： 二. 基因表达载体的构建——核心 IMN 2.组成： ①使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代。 ②同时使目的基因能表达和发挥作用。 (3)终止子：是使转录在需要的地方停止 (4)标记基因：是鉴别受体细胞中是否含有目的基因从而将含有目的基因的细胞筛选出来 (2)启动子：是RNA聚合酶识别和结合部位 (1)目的基因 不同受体细胞，目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建有所差异。 链接到幻灯片 36 1.基因的结构 （1）原核生物基因结构 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 编码蛋白质 调控遗传信息的表达 （调控程序） …A‥………ATGTGCACGTAGTTA………‥G……T‥………TACACGTGCATCAAT………‥C… 启动子 终止子 编码区 非编码区 非编码区 （能编码蛋白质） 启动子 终止子 （2）真核与原核生物基因结构的比较 外显子 内含子 编码蛋白质 （不能编码蛋白质） ①相同点：都是由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区。 ②不同点：原核细胞基因的编码区是连续的；真核细胞的编码区是间隔的，不连续的。 真核生物基因结构 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 ATGTGCACGTAGTTA TACACGTGCATCAAT RNA聚合酶 AUGUGCACGUAGUUA 启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。 RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质. 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。 返回幻灯片 32 如果一个来自动物的目的基因含有内含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。 基因的产物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性，因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上的，而细菌无这些细胞器。 ①用一定的________切割质粒，使其出现一个切口，露出_________。 ②用______________切断目的基因，使其产生_________________。 ③将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量____________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 3.构建过程 例：人胰岛素基因与质粒结合形成重组质粒 质粒 DNA分子 一种限 制酶处理 一个切口两个黏性末端 两个切口获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子(重组质粒) ?思考?用DNA连接酶处理后会出现几种产物？ 三、将目的基因导入受体细胞 阅读教材P11-13，思考下列问题： ①什么是转化？ ②农杆菌有什么特点？农杆菌转化法的过程是怎样的？将目的基因导入植物细胞的常用方法还有哪些？ ③将目的基因导入动物细胞的最常用、最有效的方法是什么？其过程是怎样的？ ④与其他生物相比，原核生物有哪些特点？将目的基因导入大肠杆菌细胞的具体方法是怎样的？什么是感受态细胞？ （一）转化： ——目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 ①特点: 能感染_______________________，对单子叶植物无感染能力；________________可转移至受体细胞并整合到其染色体上 双子叶植物和祼子植物 Ti质粒的T-DNA （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 ①特点: ②过程: 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA上→表达 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 （2）基因枪法 是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细胞 三、将目的基因导入受体细胞 （1）农杆菌转化法 （2）基因枪法 （3）花粉管通道法 是我国科学家独创的一种方法。我国的转基因抗虫棉就是用这种方法获得的。 （一）转化： （二）方法： 1.将目的基因导入植物细