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蛋白质研究技术平台 梁洁 开放实验室 2008.6.19 蛋白质相关技术 蛋白质样品的制备 蛋白质浓度的测定 蛋白质免疫印迹（western blot) 蛋白质相互作用研究 蛋白质样品制备 单层贴壁细胞总蛋白的提取： (1)收集细胞（1*106以上） (2)加入适量含蛋白酶抑制剂的裂解液 (3)冰上裂解 (4) 4℃下12000rpm离心5min,取上清，-20 ℃保存 组织中总蛋白的提取 (1) 取组织块（约0.1g) 剪碎,加液氮磨碎、匀浆、超声处理 (2) 4℃下12000rpm离心15min,取上清，-20 ℃保存 (3)膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要超滤 (4)组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性 蛋白质浓度测定 Bradford蛋白浓度测定试剂盒 1.完全溶解蛋白标准品，取10?l稀释至100?l ，使终浓度为0.5mg/ml。可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2.将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微升分别加到96孔板中，加标准品稀释液补足到20微升。 3.? 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20微升。 4.? 各孔加入200微升G250染色液，室温放置3-5分钟。 5.? 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 6.? 根据标准曲线计算出样品中