欧盟生物分析方法确证指导原则草案.docVIP

PAGE PAGE 1 生物分析方法确证指南 Guideline on Validation of Bioanalytical Methods Draft 2009 European Medicines Agency 前言（背景） 范围 法律基础 方法确证 分析方法的完整确证 选择性 残留 定量下限 校正曲线 准确度 精密度 稀释可靠性 基质效应 稳定性 部分确证 交叉确证 配体结合分析 试验样品分析 分析批 分析批的接受标准 校正范围 试验样品再分析 整合 已测样品再分析 试验报告 定义 概要 本指南定义了生物样品分析方法的关键因素并提供了建议。指南集中于药动学样品分析所用分析方法的确证。此外，也为实际分析试验样品提供了指导。 前言（背景） 对于含有新活性物质的药品，以及用于生产线延伸和仿制药开发，测定生物基质中的药物浓度都是重要的。可能需要这些数据支持新的申请以及已批准药品的变更。毒动学、药动学和生物等效性试验被用于做出关键性决定，以支持药用物质或药品的安全性和有效性。因此，很好地表征、完整地确证和记录应用的生物分析方法到一个满意标准是极为重要的。 在特殊情况下，例如分析复杂基质（如固体组织），当不能满足通常的接受标准时，可能需要使用比本指南定义得更宽接受标准。这应当说明理由并预先定义。 范围 本指南提供生物分析方法确证的要求。 此外，也涉及生物分析方法本身的特定方面，如毒动学试验和临床试验样品的实际分析。 本指南还进一步指出，何时可能使用部分确证或交叉确证，替代一个生物分析方法的完整确证。 此处不包括某些特殊技术，例如使用14C 法律基础 本指南应结合附录一（指令2001/83修订版）的第一部分和第二部分前言和一般原则来解读。它适用于临床药品上市授权申请，根据指令2001/83/EC修订版以及第726/2004号欧盟法规提交。在其中，生物基质中药物浓度的分析是申请的一部分。 生物分析方法确证和试验样品分析应符合GLP原则。但是，由于临床生物分析试验处于GLP范围之外，如指令2004/10/EC所规定，所以开展临床试验的地点不需要作为国家GLP贯彻程序的一部分被监测。此外，对于在人体开展的临床试验，应该遵循GCP原则。 此外，应参见欧洲药品管理局的下列指南： 临床试验规范指南的说明（CPMP/ICH/135/95）； 分析步骤确证指南的说明（CPMP/ICH/381/95）。 方法确证 分析方法的完整确证 对于任何分析方法，无论是新方法还是基于文献的方法，都应该进行完整的确证。 分析方法确证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性，例如全血、血浆、尿、唾液或组织。此外，方法确证应采用与试验样品相同的抗凝剂。对涉及的每个物种都要进行完整的确证。 在某些情况下，可能难于获得与试验样品相同的基质，用于确证目的。如果说明理由，可以使用适当的替代基质，例如合成制备的脑脊液。 一个生物分析方法的主要特征是确保其性能和分析结果可靠性所必需的，这些特征包括：选择性，定量下限，响应函数（校正曲线性能），准确度，精密度，基质效应，生物基质、储备液以及工作溶液中分析物和内标在储存和处理全过程中的稳定性。 通常需要测定一个分析物或药物，但有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，确证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。 对照标准物质 在方法确证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质中。此外，色谱方法通常使用内标（IS）。 对照标准物质和内标的质量得到保证是重要的，因为其质量（纯度）可能影响到分析结果。因此，应该从权威的和可追踪的来源获得对照标准物质。适当的标准物质包括：有合格证书的标准品，如法定的标准品（EPCRS, USP, WHO），商业途径获得的标准品，或实验室内部制备及外部非商业组织制备，且经过完整表征的标准品。应该科学论证对照标准物质的适用性。对于内标，不必要求有合格证书的标准品，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。 无论哪个供货商，都需要提供分析合格证书，以确认对照标准物质的质量、稳定性、储存条件、失效日期、批号和纯度。 当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。但是，标记的标准品必须具有最高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应。否则，存在任何未标记的分析物都将导致结果的偏差。 4.1.1 选择性 该分析方法应该能够区分目标分析物和内标与基质的内源性组分（如全血、血浆、尿）或样品中其他组分。应该使用至少6个来源的适宜的空白基质来证明选择性，它们被分别分析并评价干扰。当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的20%时，即可以接受。 也