微生物学通报积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚.PDF

微生物学通报 Apr. 20, 2018, 45(4): 780−787 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170344 研究报告 积磷小月菌调控蛋白 Mlp21700 的异源表达及其与 多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合 1 1 2 1 2* 钟传青 王静 宗工理 姜天翼 曹广祥 (1. 山东建筑大学市政与环境工程学院 山东 济南 250101) (2. 山东省医学科学院山东省医药生物技术研究中心 山东 济南 250062) 摘 要：【背景】积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus )是重要的聚磷微生物，在好氧条件下 积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐，这个过程可能受到精细的基因调控。【目的】利用 凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白 Mlp21700 结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子，找 到Mlp21700 可能的调控靶点。【方法】以积磷小月菌JN459 菌株的基因组DNA 为模板，PCR 扩增Mlp21700 编码序列，构建重组质粒pET28a-21700 并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株， 诱导表达后采用非变性方法纯化获得 Mlp21700 融合蛋白。利用PCR 方法分别扩增各个Poly-P 代谢基因的启动子，用生物素标记后作为探针。采用EMSA 分析Mlp21700 在试验条件下是否 结合启动子以及结合强度。【结果】 DNA 测序和酶切验证表明pET28a-21700 携带正确的Mlp21700 编码序列。SDS分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700 ，纯化 的重组 Mlp21700 蛋白纯度大于 90% ，含量为 0.64 mg/mL 。EMSA 分析表明在试验条件下 Mlp21700 能够结合 Mlp26610 基因 ppgk 和 Mlp44770 基因 ppx 的启动子。【结论】调控蛋白 Mlp21700 可能参与Mlp26610 和Mlp44770 基因的转录调控，进而调控Poly-P 的分解过程。 关键词：积磷小月菌，多聚磷酸盐，调控蛋白，启动子，凝胶迁移实验 Foundation items: National Natural Science Foundation of China ; Natural Science Foundation of Shandong Province (ZR2015EM018); Innovation Project of Shandong Academy of Medical Sciences (201604) *Corresponding author: Tel: 86-531 E-mail: caozhong0402@163.com Received: May 06, 2017; Accepted: July 11, 2017; Published online () : August 15, 2017 基金项目：国家自然科学基金 ；山东省自然科学基金(ZR2015EM018) ；山东省医学科学院医药卫生 科技创新工程项目(201604) *通信作者：Tel ：86-531；E-mail ：caozhong040