高效毛细管电泳法.pptVIP

三、HPCE中影响电渗流的因素 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 三、进样系统 一般的进样方式是电动进样和压力进样。 电动进样是将毛细管柱的一端及其相应端的电极从缓冲池中移出，放入试样杯中，然后在一准确时间范围内施加电压，使试样因离子移动和电渗流进入毛细管柱。 压力进样是用压差使试样溶液进入毛细管。产生压差的办法可以采用在出口端抽真空，或者通过进样端加压。 进样体积一般在纳升级，进样长度必须控制在毛细管总长度的1%~2%，否则将影响分离效率。 四、毛细管柱 常用弹性石英毛细管，内径50μm和75μm两种使用较多（毛细管电色谱有时用内径再大些的毛细管）。细内径分离效果好，且焦耳热小，允许施加较高电压，但若采用柱上检测因光程较短，检测限比较粗内径管要差。 毛细管长度称为总长度，根据分离度的要求，可选用20～100cm长度，进样端至检测器间的长度称为有效长度。 毛细管柱中充入缓冲溶液，柱的两端置于两个缓冲池中。毛细管常盘放在管架上控制在一定温度下操作。 五、检测系统 紫外-可见光分光检测、激光诱导荧光检测、电化学检测和质谱检测均可用作毛细管电泳的检测器，其中以紫外-可见光分光光度检测器应用最广。 将毛细管接近出口端的外层聚合物剥去约2mm一段，使石英管壁裸露，毛细管两侧各放置一个石英聚光球，使光源聚焦在毛细管上，透过毛细管到达光电池。 六、数据处理系统 与一般色谱数据处理系统基本相同。 第四节 分离模式及其分离条件的选择 一、毛细管区带电泳（CZE） 毛细管区带电泳也称为自由溶液溶液区带电泳,是毛细管电泳中最简单，应用最广泛的一种形式。这种电泳模式的特征是整个系统都用同一种缓冲溶液充满。带电粒子的迁移速度是电泳和电渗流速度的矢量和。不同离子按照淌度的差异,以不同的速度在电解质中移动, 而实现分离。 （一）分离原理 在一般情况下，电渗流流向负极，电渗流速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍。当把试样从阳极端注入到毛细管内时，不同电性的粒子将按不同的速度向负极迁移，从负极端先后流出毛细管。首先是最快的阳离子，紧接着是依次减慢的阳离子，然后是全部的中性分子在一个区域出现，最后是最慢的阴离子，紧接着的是依次加快的阴离子。 （二）分离条件的选择 1．缓冲液 电泳过程在缓冲液中进行，缓冲液的选择直接影响粒子的迁移和最后的分离. 缓冲液的选择通常须遵循下述要求： （l）在所选择的pH范围内有很好的缓冲容量； （2）在检测波长处无吸收或吸收值低； （3）自身的淌度低，即分子大而荷电小， 以减少电流的产生 （4）为了达到有效的进样和合适的电泳淌度，缓冲液的pH值至少必须比被分析物质的等电点相差l个pH单位。 (5)只要条件允许就尽可能采用酸性缓冲液，在低pH值下，吸附和电渗流都很小，毛细管涂层的寿命较长。 在配制毛细管电泳用的缓冲液时，必须使用高纯蒸馏水和试剂，另外用前要用0.45μm的滤器过滤以除去颗粒等。 7.50 7.55 8.00 8.15 8.20 8.25 8.30 8.35 8.49 9.24 9.50 9.60 10.40 N-三[羟甲基]甲基-2-氨基乙磺酸 N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸 N-[2-羟乙基]哌嗪-N-2-羟丙磺酸 N-[（2-羟甲基）乙基]甘氨酸 甘氨酰胺，盐酸化物 N-甘氨酰甘氨酸 三（羟甲基）氯基甲烷 N,N’-双[2-羟乙基]甘氨酸 吗啉 硼酸盐 2-[N-环己氨基]乙磺酸 3[（3-胆酰胺丙基）-二甲基铵]- 2-羟基-1-丙磺酸内盐 3-[环己氨基]-1-丙磺酸 2.l2 3.06 3.75 3.97 4.l9 4.32 4.75 6.15 6.60 6.80 6.80 6.90 6.90 7.00 7.20. 磷酸 柠檬酸 甲酸盐 2-羟基异丁酸 琥珀酸盐 谷氨酸 乙酸盐 2-[N-吗啉]乙磺酸 N-[2-乙酰氨基]-2-亚氨基双乙酸 L,3-双[三（羟甲基）甲氨基]丙烷 哌嗪-N,N’-双[乙磺酸] 2-[（2-氨基-2-氧代乙基）氨基]乙磺酸 3-[N-吗咪]-2-羟基丙磺酸 咪唑 3-[N-吗啉]-丙磺酸 pKa 名 称 pKa 名 称 一些常用缓冲溶液及其pKa值 2．添加剂 在CZE分离中，常常还在缓冲溶液中添加某种试剂，通过它与管壁或与样品溶质之间的相互作用，改变管壁或溶液相物理化学特性，进一步优化分离条件，提高分离选择