核苷酸酶的检测和临床意义.pptVIP

?5‘-核苷酸酶(5-NT)的检测和临床意义 一.定义 ?5‘-核苷酸酶全称5’-核糖核苷酸磷酸水解酶（5‘-Nucleoticlase, 5’-NU或5‘-NT）。5’-核苷酸酶(5‘-NT)是一种对底物特异性不高的水解酶，可作用于多种核苷酸。主要参与核酸的分解代谢。能特异性的催化核苷5’-核苷酸酶和次黄嘌呤核苷酸。 5‘-NT在人体的运动，细胞生长发育，纤维蛋白合成，提高表皮或内皮屏障功能，神经传递及淋巴细胞的再循环及黏附，免疫应答等方面均发挥重要的作用。 广泛分布在肝、胆、胰、肠、心、脑、肺、肾、垂体、甲状腺、前列腺、睾丸等脏器和组织中，定位在细胞膜上，肝胆系统是血清中5’-核苷酸酶的主要来源。在肝内主要存在于胆小管和窦状间隙内。 二.来源和去路 5‘-NT要释放入血必须要经肝胆系统内的高浓度胆汁酸去垢处理 三.检测方法 钼蓝比色法 化学发光法 酶法 偶联速率法 四.实验原理 5′-核苷酸酶（5′-NT）催化5′-次黄嘌呤核苷酸水解生成次黄苷和氨，次黄苷在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD）作用下生成尿酸和过氧化氢（H2O2），H2O2与4-氨基安替比林（4-AA）和TOOS在过氧化物酶（POD）作用下生成醌亚氨化合物，通过测定相应波长处吸光度变化值得出样本中5′-NT活性。 五.标本的采集及保存 1．细胞培养物：离心后收集上清液，并将标本保存于-20℃。2．血清：室温放置2小时内或2 - 8 ℃ 24H，1000 x g离心20分钟。3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于1000 x g离心15分钟。 4.2 - 8 ℃可放置24小时， -20℃可放置一星期，但应避免反复冻融。 标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 六.参考范围 速率法：正常成人血清5’-NT酶活性为：0-11?U/L? 钼蓝双色法：健康成年人5’-NT活性为2-17?U/L，儿童稍低。60岁以上老人的均值约为青壮年的2倍。 七.临床意义 ⒈ 5-NT活性增高常见于原发性和转移性肝癌、胆道癌、胰腺癌、胆道阻塞、胆管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、药物性肝损伤。其活性增高可达2～6倍，且与病情严重程度呈正相关。? ⒉ 5-NT是诊断肝肿瘤非常灵敏的酶学指标。在病变早期，当肝功能、肝扫描和有关肝病检查阴性时本酶活性已明显增高。对于AFP阴性病例，其与AFP互补诊断肝癌的阳性率可达94％。? ? ? ⒊ 特异性高，能协助判断碱性磷酸酶（ALP）增设是肝胆系统疾病，还是骨髓系统疾病（如骨癌、骨肉瘤、骨转移癌、佝偻病等）。ALP在肝胆系统疾病和骨骼系统疾病时均可增高。除5-NT除肝胆系统疾病增高外，骨骼系统疾病一般均不升高。? ⒋ 有助于鉴别诊断肝细胞性黄疸和阻塞性黄疸。后者5-NT明显高于前者。? ? ⒌ 5-NT已作为肝功能常规项目检查进入临床，将能使临床医生更全面地了解患者肝脏情况，提高其临床应用价值。 谢谢