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α1-at活性测定,实验报告 　　淀粉酶活性的测定　　一、实验目的　　酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。　　淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。α-淀粉酶是一种典型的内切型淀粉酶,主要作用于淀粉水解的液化阶段,因此又叫液化酶。作为一种最重要的工业酶制剂，α-淀粉酶广泛存在于动物,植物和微生物中。其中，微生物α-淀粉酶以其经济易得成为工业生产主要来源。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种。　　本实验采用杨氏改良法测定α-淀粉酶；掌握测定α-淀粉酶活性大小与温度关系的方法，通过分析得出酶的最适温度范围。　　二、实验原理　　酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和pH值称为某种酶作用时的最适温度和pH值。温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低，其变化趋势呈钟形曲线变化。　　不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。　　本实验通过淀粉遇碘显蓝色，淀粉含量越高，颜色越深。用分管光度计检测显色效应大小，通过分管光度值计算酶活力　　注意：实验中为了消除非酶促反应引起的淀粉水解带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。　　在实验中要严格控制温度及时间，以减小误差。并且在酶的作用过程中，三　　支测定管及空白管不要混淆。　　三、材料、试剂与仪器　　实验材料：α-淀粉酶　　仪器：分光光度计、电热恒温水浴锅、小台秤、研钵、玻璃仪器若干试剂：　　①NaOH/CH3COOH及HCl：　　②%工作碘液：克I2和克KI水中研磨，定容至1000mL；　　③1%糊化淀粉溶液：称取克淀粉，加入NaOH，60℃5min，冷却后加CH3COOH，定容至100mL；　　④稀释α-淀粉酶溶液：待测样品　　四、实验步骤　　①10mL1%淀粉溶液加入试管中，室温25/45/65℃保温10min　　②于每管中各加酶稀释液1mL，在室温25/45/65℃恒温水浴中准确加热10min，冷却。　　③加1mL1M盐酸终止反应。　　⑤取上述混合液1mL加入预先装好10mL工作碘液的试管，摇匀。　　⑥660nm测吸光度，记录数据。　　对照组为不加酶液，加相应体积的水　　五、数据整理及计算　　根据以上的数据整理的结果，结合以下公式计算两种淀粉酶的活性：　　酶活=[(D0-D)*100/D0*10]*稀释倍数　　D—反应混合液吸光度　　D0—对照组吸光度　　100—系数(%)　　10—反应时间　　酶活定义：1克α-淀粉酶单位相当于在pH，温度25、45、65℃，1min将浓度为1%的淀粉溶液的显蓝强度降低1%时所需酶量。　　淀粉酶活性的测定　　一、研究背景及目的　　酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到　　淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种子中，而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。　　α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内　　本实验的目的在于掌握α-淀粉酶和β-淀粉酶的提取和测定方法。　　二、实验原理　　萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在下则发