分子生物学课件—原核表达调控-3.ppt

6 转录水平上的其他调控方式 转录过程涉及转录机器附着与DNA，识别启动子序列，起始RNA的合成，延伸和终止。转录的任何一步都受到调控。转录水平上以下其它调控方式： σ因子的调节作用 组蛋白类似蛋白的调节作用 转录调控因子的作用 抗终止因子的调节作用 6.1 σ因子的调节作用 不同的σ因子可以独立地起作用，但是，为了保证细胞准确地响应不同的环境信号变化，σ因子之间常常交互作用构成网络调控模式，使得原核基因的表达稳定而平衡。 σ因子本身的活性受蛋白水解酶的调控，也能被同源的抗σ因子失活。 抗σ因子能够与特定的σ因子结合，阻止它们与RNA聚合酶组装。 σ 亚基（σ factor ）的功能是帮助核心酶识别启动子，它不是RNA链延伸必需的。 σ能提高RNA聚合酶与特异启动子的亲和力，也能降低与非特异启动子的亲和力。 新生RNA链达到6-9个核苷酸，形成稳定的酶-DNA-RNA复合物时，σ因子释放。 Theσ factor 通过降低核心酶与非特异序列的亲和力,和增加其与启动子的亲和力来帮助核心酶识别启动子。 无σ factor 的核心酶也能在DNA模板上合成RNA，但不能正确地起始转录。 E.coli有不同的σ factor 分别转录不同类型的基因。这在基因表达调控中起重要作用。 6.2 组蛋白类似蛋白的调节作用 细菌中存在一些组蛋白类似蛋白，能非特异地结合DNA，维持其高级结构（例如H-NS）。H-NS与大肠杆菌基因组上分散的大量基因的调控区有较高的亲和性，这些基因大都与环境条件的变化有关，H-NS的结合能抑制这些基因的转录。 6.3 转录调控因子的作用 大肠杆菌中大约有300多个基因编码与启动子区结合的蛋白，它们能激活或抑制转录，称为转录调控因子。 它们大多是序列特异性的DNA结合蛋白，能与特定的启动子结合。 有些转录调控因子能调控很多基因的表达（如CRP, FNR, IHF, Fis…），有些只能调节一两个启动子。 许多基因的启动子区有多个转录调控因子的结合位点，共同作用才能使RNA聚合酶顺利起始基因转录。 ?噬菌体是以E.coli为宿主的温和病毒。它一旦感染细菌就会以2种方式繁殖。 ①溶源途径：?噬菌体感染E.coli后，将其基因组整合到细菌染色体上，随着细菌染色体的复制而复制。整合有噬菌体基因组的细菌称为溶源菌，这一过程称为溶源途径。 ②溶菌途径：?噬菌体感染宿主后也可以利用细菌细胞内的养料进行繁殖，最终使宿主裂解而死亡，这一过程称为溶菌途径。溶菌途径需要噬菌体DNA的复制和病毒外壳蛋白的形成。 溶源性细菌在正常情况下非常稳定；但在细菌受某些外界物理或化学因素(如紫外线、丝裂霉素C等)的作用，就会有效的转向溶菌途径。原噬菌体便脱离细菌染色体而进行自主复制，于是细菌裂解，游离出大量的噬菌体，这一过程称为溶源性诱导。 对繁殖途径的选择依赖于细胞对2种选择性基因表达程序的选择。 Bacteriophage Lambda 7. 转录后调控 基因表达的转录调控是生物最经济的调控方式。但转录生成mRNA以后，再在翻译或翻译后水平进行“微调”，是对转录调控的补充，它使基因表达的调控更加适应生物本身的需求和外界条件的变化。调控方式有： mRNA自身结构元件对翻译起始的调控 mRNA稳定性对转录水平的影响 调节蛋白的调控作用 反义RNA的调节作用 稀有密码子对翻译的影响 重叠基因对翻译的影响 翻译的阻遏 魔斑核苷酸水平对翻译的影响 7.1 mRNA自身结构元件对翻译起始的调控 大肠杆菌有14%的基因起始密码子是GUG、3%为UUG，另有两个是AUU，这些密码子与fMet-tRNA的配对能力弱，从而导致翻译效率下降。 RBS的结合强度取决于SD序列的结构及与AUG的距离。SD与AUG相距一般以4～10核苷酸为佳，9核苷酸最佳。 mRNA的二级结构也是翻译起始调控的重要因素。因为核糖体的30S亚基必须与mRNA结合，要求mRNA5’端有一定的空间结构。SD序列的微小变化，往往会导致表达效率成百上千倍的差异，这是由于核苷酸的变化改变了形成mRNA 5’端二级结构的自由能，影响了30S亚基与mRNA的结合，从而造成了蛋白质合成效率上的差异。 7.2 mRNA稳定性对转录水平的影响 所有细胞都有一系列核酸酶，用来清除无用的mRNA。一个典型的mRNA半衰期为2-3min。mRNA分子被降解的可能性取决于其二级结构。 7.3 调节蛋白的调控作用 细菌中有些mRNA结合蛋白可激活靶基因的翻译。相反，mRNA特异性抑制蛋白则通过与核糖体竞争性结合mRNA分子来抑制翻译的起始。大肠杆菌中的核糖体蛋白就存在翻译抑制现象。 7.4 反义RNA的调节作用 RNA调节是原核基因表达转录后调节的另一种重要机制。细菌响应环境压力