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dna重组实验报告 　　DNA转化实验报告　　XX级生物学基地班李晓芬　　【摘要】　　DNA转化是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段。本实验以DH5Α菌株为受体细胞,并用CaCl2处理,使其处于感受态,然后与pUC-19质粒共保温,实现转化。由于pUC-19质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Ampr)，可通过在培养基中加入氨苄青霉素，利用Amp抗性来筛选转化子。同时，蓝白斑法对能够产生β-半乳糖苷酶的转化子进行筛选，最终成功得到了预期的实验组蓝色菌落、对照组无任何菌落的结果。　　Inmolecularbiology，transformationisthegeneticalterationofacellresultingfromthedirectuptake,incorporationandexpressionofexogenousgeneticmaterial(exogenousDNA)fromitssurroundingandtakenupthroughthecellmembrane(s).DH5ΑisusedtoselecttherecombinantDNAusingtheactivityofβ-galactosidase(α-complementation)recoveredwithlacZαpeptideofthevectorDNAandlacZM15codedinFepisomeinthisstrain.ThisstraincarriesFepisomeanditisusefulforthepreparationofssDNAaswellasgenelibraryconstructionandsubcloning.　　【关键词】DNA转化、CaCl2法、大肠杆菌、质粒、氨苄青霉素抗性、蓝白斑筛选　　一、实验目的　　掌握CaCl2法将载体(质粒)转化入受体(大肠杆菌)的实验技术。　　二、实验原理　　1、转化：在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。转化即是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。　　转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2,RbCl、KCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子(带有异源DNA分子的受体细胞)。　　本实验中，采用较为简便易行的感受态细胞获得办法CaCl2法，用蓝白斑筛　　选法筛选转化子。　　2、载体pUC-19质粒带有氨苄青霉素抗性基因，而宿主菌DH5Α对氨苄青霉素没有抗性。在用pUC-19质粒转化DH5Α后，涂布到含有氨苄青霉素的培养基上培养，没有被转化的菌不能生长，而被转化了的菌可以正常生长，形成菌落。　　3、α-互补：pUC-19质粒带有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酶基因的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。DH5Α宿主菌染色体上带有LacZ的C端部分编码信息，它们编码的肽段各自都不具有酶活性,但它们在同一细胞内可以通过非共价键结合起来,形成具有β-半乳糖苷酶活性的蛋白质。质粒载体与LacZ基因上缺失近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的大肠杆菌突变体之间的这种互补作用就称为α-互补。　　4、如图一，IPTG是β–半乳　　糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特　　性，当pUC系列的载体DNA以lacZ缺　　失细胞为宿主进行转化时，如果在平　　板培养基中加入X–Gal和IPTG，由　　于β–半乳糖苷酶的α–互补性，　　可以根据是否呈现白色菌落而方便　　地挑选出基因重组体。此外，它还可　　以作为具有lac或tac等启动子的表　　达载体的表达诱导物使用。　　如图二，只有成功进行了载体与　　受体α-互补之后的细菌，才能产生具有β-半乳糖苷酶活性的蛋白质，将乳糖转化为半乳糖和葡萄糖，即使底物X-gal水解变为蓝色；而未能将质粒DNA成功导入的细菌则不能形成β-半乳糖苷酶，实现了蓝白斑筛选。　　三、实验材料　　1、试剂　　⑴药品准备：蛋白胨、酵母粉、