稳定表达荧光素酶基因的TC-1细胞系的构建-郑州大学学报医学版.PDF

Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences)　 Jul.　 2018　 Vol.53　 No.4 ·429 · doi:10.13705/ j.issn.1671-6825.2017.10.005 稳定表达荧光素酶基因的TC-1细胞系的构建 韩笑笑,刘丽雅,谭超月,李　 元,高君碧,韩丽萍 郑州大学第一附属医院妇科;河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 郑州450052 关键词　 TC-1细胞;荧光素酶;活体成像;生物发光;宫颈癌 中图分类号　 R711.74 摘要　 目的:通过表达荧光素酶的慢病毒载体感染TC-1细胞株,建立稳定表达荧光素酶的TC-1细胞株。 方 法:根据荧光素酶基因设计引物,PCR扩增获得目的基因,构建表达荧光素酶的慢病毒载体并包装重组慢病毒,感 染TC-1细胞。 嘌呤霉素加压筛选,鉴定。 用双荧光素酶报告基因检测试剂盒及体外成像系统进行荧光素酶活性 检测。 结果:经检测证实细胞感染及筛选后,成功构建了稳定高表达荧光素酶的TC-1细胞。 结论:获得荧光素酶 稳定表达的TC-1细胞,转染效果确切,荧光素酶基因表达稳定。 Establishment of luciferase-labeled TC-1 cells HAN Xiaoxiao,LIULiya,TAN Chaoyue,LI Yuan,GAOJunbi,HAN Liping Department of Gynecology,theFirstAffiliatedHospital,Zhengzhou University;Key-DisciplinesLaboratory of Clinical-Medicine of Henan Province,Zhengzhou450052 Keywords　 TC-1cell;luciferase;imaging invivo;bioluminescence;cervical cancer Abstract　 Aim:To establish luciferase-labeled TC-1 cells. Methods:TC-1 cells were infected by lentivirus pack- aged by recombinant lentiviral vectors containing luciferase gene. Puromycinwasusedtofilter the cells. The expressing of luciferase in TC-1-luc cellswas detected by immunofluorescence imaging and in vivo imaging system. Results:After cell infection and screening,it was shown that a stableTC-1cell line stably expressing luciferase had been built.Conclusion: TC-1cell line stably expressing luciferase has been obtained. 　 　 宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之 皮细胞,通过接种TC-1细胞于小鼠宫颈阴道黏膜, 一,主要病因是人乳头瘤病毒(human papilloma vi- 可构建宫颈癌动物模型,进行相关肿瘤实验研究。 [1-2] rus,HPV)感染,其中HPV16、18是主要致病型 。 荧光素酶(luciferase)报告基因作为一种常用的报告 TC-1细胞为含有HPV16型E6/ E7基因的小鼠肺上 基因系统,在细胞中的背景非常低,生物荧光穿透力 【基金项目】国家自然科学基金资助项目(U1604172) 【作者简介】韩丽萍,通信作者,女,1969年8月生,博士,教授,研究方向:妇科肿瘤与内分泌,E-mail:hanliping0825@163.com ·430 ·