PCR反应体系与反应条件.docVIP

实用文案 标准文档 PCR反应体系与反应条件 -------------------------------------------------------------------------------- ? 标准的PCR反应体系： 　　　　　　 10×扩增缓冲液 　 10ul 　　　　　　 4种dNTP混合物 　 各200umol/L 　　　　　　 引物 　　　　 　 各10～100pmol　 　　　　　　 模板DNA 　　　 　0.1～2ug　 　 　　　　　Taq DNA聚合酶 　 2.5u　 　　　　　　 Mg2+　　　　　　 1.5mmol/L 　　　　　　 加双或三蒸水至 　100ul ? 　　PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ ? 　　引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则： ①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随