王金发细胞生物学第12章-(PPTminimizer).ppt

CHAPTER 12 cell cycles and cell division OUTLINE 12.1 CELL CYCLE 12.2 REGULATION OF CELL CYCLE 12.3 MITOSIS 12.4 MEIOSIS 12.1 cell cycles 细胞周期是指连续分裂的细胞从 一次有丝分裂结束后开始生长到下次 有丝分裂终止所经历的全过程。在 这一过程中,细胞的遗传物质进行复 制并均等地分配给两个子细胞。 12.1.1 细胞周期时相及类型 ?Phases of the cell cycle ◆G1期(Gap 1 phase),即从M期结束到S期开始前的一段间歇期; ◆S期,即DNA合成期(DNA synthetic phase); ◆G2期(Gap 2 phase), 即DNA合成后(S期)到有丝分裂前的一个间歇期; ◆M期,即有丝分裂期(mitosis phase)。 不一定每种细胞都有四个时期，如胚胎细胞没有G1期。 ?细胞周期和细胞类群 ◆持续分裂细胞 ◆终端分化细胞 永久性失去了分裂能力的细胞。 ◆G0细胞 又称休眠细胞。暂时脱离细胞周期,不进行增殖,也叫静止细胞群,如某些免疫淋巴细胞, 肝,肾细胞等。 12.1.2 细胞周期的研究方法 ?细胞同步化(synchronization) ◆选择同步法(selection synchrony) ●有丝分裂选择法 ●细胞沉降分离法 ◆诱导同步法 ●DNA合成阻断法 ●中期阻断法 ◆条件突变(conditional mutants) 12.1.3 细胞周期各时 相的合成活动 ◆G1期 (Gap1 phase) ◆S 期 (synthesis phase) ◆G2 期(Gap 2 phase) ◆ M期 12.2.1 细胞周期调控概述 ◆细胞周期的控制系统 (cell-cycle control system) 细胞周期的控制类似于中央控制系统 (central control system)。 12.2.2 蛋白激酶在细胞周期调控中的作用 ?细胞融合实验 ◆研究者：1970年，Colorado 大学的Potu Rao 和 Robert Johnson ◆研究思路 ◆研究方法 ◆使用的细胞系 ◆预测结果 ●早熟染色体凝集(premature chromosome condensation,PCC ） ?MPF的发现 成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF）,早期称为M-期促进因子(M-phase promoting factor, MPF)，是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子 ◆研究思路 ◆实验设计 ●实验材料的选择 ●实验方法 ◆结果预测 ◆实验结果与分析 ●发现 ●推论 ?细胞周期蛋白的鉴定 ◆研究思路 ◆实验设计（注意关键步骤的用意！！！） ●获得同步化的受精的海胆卵细胞 ●在有放射性氨基酸的培养液中培养 ●每10分钟取一次样分离纯化蛋白质进行分析 ◆实验结果 ●发现了周期蛋白B(cyclin B)：如何发现？ ●周期蛋白B的cDNA克隆与周期蛋白B的鉴定 ?MPF的结构组成 ◆是由两个不同的亚基组成的异质二聚体: ●催化亚基 ▲是丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶 ▲其活性有赖于周期蛋白，故蛋白称为周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent protein kinases,Cdks); ●调节亚基：周期蛋白(cyclin)。 ?遍在蛋白与周期蛋白的降解 ◆多遍在蛋白化作用(polyubiquitination) ●遍在蛋白活化酶(ubiquitin-activating enzyme, E1) ●遍在蛋白缀合酶(ubiquitin-conjugating enzyme, E2) ●遍在蛋白连接酶(ubiquitin ligase, E3) ◆蛋白酶体的降解作用 ◆促后期复合物 (anaphase-promoting complex, APC) ?APC的活性调节控制周期蛋白B的降解 ◆当MPF的活性在有丝分裂中期达到最高峰时, 它将APC磷酸化并将其激活； ◆接着发生周期蛋白B遍在蛋白多聚化, 引起周期蛋白B的降解； ◆由于周期蛋白B是MPF的一个必需亚基, 它的降解势必导致MPF的失活； ◆在G1期的后期,APC失活,使得周期蛋白B的浓度升高,同时提高MPF的活性, 以便进入下一个有丝分裂期。 ?真核生物细胞周期调控的一般模型 ◆三类周期蛋白-CDK复合物: ●G1期周期蛋白-CDK复合物 ●S期周期蛋白-CDK复合物 ●有丝分裂周期蛋白-C