亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性课件.pptVIP

※ 为2006年1月至2007年4月江苏省肿瘤医院就诊的并行新辅助化疗的乳腺癌患者，共61例； ※ 术前均取得病理学/细胞学示恶性的证据； ※ 均经临床或影像学检查证实有可测量病灶； ※ 化疗前各项常规检查均未显示化疗禁忌； ※ 术后常规行病理学检查，检测化疗反应的程度。 下面来看一下我们统计的一些数据。 根据以上结果我们可以得出一个结论：MTHFR C677T基因多态性的作用与乳腺癌新辅助化疗敏感性之间存在着一定的相关性。 我们可以把1298基因多态的作用作为预测乳腺癌新辅助化疗敏感性的一个参考指标。 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系的研究探讨 乳腺癌（breast cancer)是女性最常见的恶性肿瘤，近年来乳腺癌的发病率呈现着上升趋势。据统计目前全世界每年死于乳腺癌的病例约为41万人，约占女性全部癌症死亡病例的14% ，居女性癌症死因的首位或第二位。 ◆ 研究目的和意义 ■目的：研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因 C677T、A1298C多态与乳腺癌患者对新辅助 化疗敏感性的关系。 ■意义：寻找可靠的预测指标指导个体化治疗, 从而 为进一步实现乳腺癌规范化综合治疗提供参 考依据。 ◆ 研究对象 2008年1月至2009年4月 在江苏省肿瘤医院就诊 的61例乳腺癌患者 新辅助化疗 恶性证据 可测量病灶 术后病理 ◆ 评定标准 ▲ 化疗疗效的评定标准： 参照WHO实体瘤疗效评定标准 分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(SD)和进展(PD)。 以CR和PR为有效 ▲ 化疗后病理反应分级标准 0级： 癌细胞没有变化； I级： 癌细胞有轻度变化或有显著变化但＜2/3的 范围 II级 癌细胞显著变化达2/3或以上 III级 癌细胞完全消失或坏死，被肉芽组织和(或) 纤维组织替代 把I～III级定为病理有反应！ ◆ 实验技术路线 ★ 白细胞层DNA提取步骤 ● MTHFR C677T 多态性检测方法 ● 结果判断 ● Hinf I酶切MTHFR 677基因DNA片段产物电泳图 ▲ MTHFR A1298C多态性检测方法 ▲ 结果判断 ▲ Mbo Ⅱ酶切MTHFR A1298C基因DNA片段产物电泳图 §试剂: 4×dNTPs（宝生物工程(大连)有限公司)) 引物（宝生物工程(大连)有限公司) Taq 酶(北京博瑞科技有限公司) 限制性内切酶Hinf I(宝生物工程(大连)有限公司) 10×Buffer(宝生物工程(大连)有限公司) §仪器: PCR 扩增仪两台(美国MJ公司，德国Biometra公司) 冷冻高速离心机(0～16000r/min) (德国Eppendorf公司) 可调式移液器(0～2μl, 0～100μl, 0～1000μl)(GILSON公司) ● MTHFR C677T基因多态性检测方法 PCR扩增MTHFR 677基因片段 (198bp) MTHFR 677基因型检测 （Hinf I酶切PCR扩增产物） 结果判断 ● 结果判断 1）当为677C/C基因型时， PCR产物不能被限制性内切酶Hinf I 酶所识别，PCR产物则不能被消化，琼脂糖凝胶上表现为198bp片段，可清晰见到198bp一条亮带。 2）当为677T/T基因型时，PCR产物被限制性内切酶Hinf I酶消化后可产生175bp、23bp二个新的片段。其中23 bp的片段由于太短而无法在凝胶上清楚的显示，故琼脂糖凝胶上只可清晰的见到175bp一条亮带。 3）当为677C/T基因型时，可产生198bp、175bp、和23bp三个片段。其中23bp的片段由于太短而在凝胶上无法清楚显示，故琼脂糖凝胶上只清晰见到198bp和175bp两条亮带。 ● Hinf I酶切MTHFR 677基因DNA  片段产物电泳图 lane 1: Maker; lane 2: C/C genotype; lane