甲基转移酶、生物硫醇检测新方法分析-分析化学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 I I 摘 要 DNA 甲基化在人类基因组中表观遗传修饰和在基因的调控中起重要作用。 在异常的甲基化中，甲基转移酶将 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）的甲基转移到 CpG 岛上胞嘧啶的 C5 位置上。CpG 岛中基因启动子区域异常甲基化是新一代癌症生 物标志物，因此，对于快速检测 DNA 甲基化和转移酶活性可以为早期癌症诊断 提供一种有效的方法。然而，传统分析检测甲基转移酶的方法具有耗时、费用 高以及灵敏度不高等缺点。所以，迫切需要发展新方法，实现快速、简单、灵 敏检测甲基转移酶活性，同时检测 CpG 岛的甲基位点可以用于确定特定的癌症 类型。为抗癌药物发展和癌症诊断提供了理论基础。本文研究内容主要包括以 下两个方面： （1）基于酶辅助双信号放大的电化学方法高灵敏检测 Dam 甲基转移酶活 性。首先，通过 DNA 杂交作用将二茂铁-DNA（S2）组装到巯基-DNA（S1）修 饰电极表面，产生二茂铁的良好电化学信号。Dam 甲基转移酶能将 S-腺苷甲硫 氨酸（SAM）上的甲基转移到发夹 DNA 的腺嘌呤的 N6 位置上，进而限制性内 切酶 Dpn I 将发生甲基化的发夹 DNA 在甲基化位点剪切，释放出单链 DNA（S3）。 将制备的巯基-DNA（S1）和二茂铁-DNA（S2）修饰金电极探针浸泡在以上溶 液中，释放出的 S3 与修饰金电极双链探针中的 S2 凸出的部分杂交形