[高等教育]动物细胞培养和核移植技术讲课.ppt

一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 探究 有关概念 4、应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 基因工程的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 ① 成功率低 ② 克隆动物存在健康问题 ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议 思考题 * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 动物细胞核移植 常用 技术 手段 （基础） 1、概念： 原理： 细胞增殖 动物胚胎或幼龄 动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质 2、过程 动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶没有活性。 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，分裂能力强 2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 4.什么叫细胞贴壁？ 5.什么叫接触抑制？ 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 探究 6、如何理解原代培养和传代培养？ 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？ 9、有些为何能一直传下去？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 遗传物质发生改变，朝着癌细胞方向发展 不都能 单个细胞传至十代左右（分装前的细胞培养） 将原代细胞从培养瓶中取出，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养。 10到50代的细胞，遗传物质没发生改变。 超过50代的细胞，遗传物质发生改变，可无限增殖。 细胞贴壁: 接触抑制: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，称为接触抑制。 原代培养： 传代培养： 细胞株： 细胞系： 补充 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 剪碎 胰蛋白酶处理 胰蛋白酶除了可消化细胞间的蛋白质外，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 细胞贴壁、接触抑制 培养液培养 一般而言，10代以内能保持正常二倍体的核型 增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核可能会发生变化， 2、过程 1、无菌、无毒 2、营养（培养基成分） 3、适宜的温度和PH值 4、必要的气体条件 （糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、 血清、血浆等。） O2和CO2 3、条件： 添加一定量的抗生素 定期更换培养液 培养液和培养器具无菌处理 培养基的不同是动物细胞培养和植物组织培养最重要的区别 36.5 +0.5度 PH为7.2-7.4 CO2的主要作用是维持培养液的PH 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植株 培养结果 获得细胞或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 动物血清 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 二、动物细胞核移植技术和克隆动物 1.动物细胞核移植的概念、种类： 2.体细胞核移植的过程： 3.体细胞核移植技术的应用前景： 4.体细胞核移植技术存在的问题： 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 概念： 1.动物细胞核移植的概念、种类： 例：克隆羊 黑面绵羊去核卵细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 2.体细胞核移植的过程： 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植