鸡Ⅱ型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究-耳鼻咽喉科学专业论文.docxVIP

塑!I!查兰!竺!兰堡主!窒竺望、业笙苎 塑!I!查兰!竺!兰堡主!窒竺望、业笙苎 些!竺鉴竖壁兰竖堕皇皇垄墨竺皇!堕堕兰竺!!墨L 鸡II型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究 研究生 汪晓凯 导师 赵玉林 郑州大学第一附属医院耳鼻咽喉科450052 摘 要 背景与目的许多感音神经性聋与免疫因素有关，但在临床工作中常不被 重视。部分突聋、梅尼埃病、耳硬化症、慢性中耳炎、颞骨创伤，以及一些伴发 听力丧失的全身免疫性疾病都存在内耳免疫损伤因素。目前，免疫相关性内耳疾 病的名称有多种，自身免疫性内耳病(autoimmune inner catdisease，AIED)是其 暂定统称。在不影响听力的前提下，不可能对内耳进行活检，故对此病的研究和 认识受到限制。建立此类疾病的动物模型成为研究此类疾病的有效途径。对此类 疾病的研究国内外所用抗原主要有：II型胶原(type IIcollagen，CII)、内耳膜 组织抗原(同种异体动物或异种动物)和异种动物血清等。建立动物模型的方式 主要有：系统性免疫、单纯内耳局部免疫和系统加内耳局部免疫等。但是，内耳 局部注入抗原的方法不妥，虽然激发了内耳强烈的免疫反应，但只代表部分AIED 临床发病机理(手术或外伤致内耳抗原暴露于内耳免疫系统)，不能包括全部。 II型胶原成分相对单一，而且已经在疑似AIED疾病患者体内发现II型胶原抗 体。国内外有学者用II型胶原尝试建立了不同动物的AIED模型，但结果差异较 大、观点不一；并且鲜有对此模型发病初期细胞间粘附因子一1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM．1)表达的研究。 为了明确II型胶原是否在AIED发病中起关键作用，以及研究模型建立初期 ICAM一1的表达情况，本实验用鸡II型胶原建立豚鼠自身免疫性内耳病模型，用 郑卅f大学2004年顺十研究生毕业论文 郑卅f大学2004年顺十研究生毕业论文 鸡Jl型胶原建市豚鼠自身免疫性内耳病的实验研究 免疫组织化学技术观察模型建立初期ICAM．1的表达情况，并从功能、形态方面 评价动物模型的内耳损伤情况。 材料与方法选用耳廓反射灵敏，体重150—200克纯白红目豚鼠65只，雌 雄不限，随机分为以下三组：I组：对照组(10只，20耳)，不施加任何因素， 与IⅡ组相同时间点各处死5只；II组：佐剂组(15只，死亡1只，28耳)，首次 皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freundadjuvant，CFA)O．1ml，以后每周皮下注 射1次0．1ml不完全弗氏佐剂(incomplete Freundadjuvant，IFA)，共注射6次， 分别于末次注射后第3天和2周处死7只；ⅡI组：实验组(40只，死亡3只)， 首次皮下注射鸡II型胶原(400“g)与CFA的乳浊液0．1ml，以后每周皮下注射1 次鸡II型胶原(200u g)与IFA的乳浊液0．1ml，共注射6次，末次注射后3天和2 周分别处死19只、18只。各组动物均在处死前测定ABR。测试每只豚鼠两耳的 ABR阈值、各波潜伏期及I．Ⅲ波波间期，以70 dBSPL刺激强度所得出的各测 试参量进行统计学分析。处死后I组和1I组均用2只(4耳)作扫描电镜观察， ⅡI组用5只(10耳)作扫描电镜观察， 剩余动物内耳作石蜡包块供免疫组织化 学测1CAM一1的表达以及HE染色观察。 实验数据用SPSSl0．0软件处理。 结果 1．ABR测试结果 各波潜伏期及I．ⅡI波波问期，在I组和II组之间差异 无显著性(PO．05)，III组较I组和II组有延长(PO．05)，In组2周较3天时有 延长(PO．05)。听觉闽值：I组和Ⅱ组之间差异无显著性(P0．05)，II／组较I 组和11组有升高(P(0．05)，III组2周时较3天时有升高(PO．05)。III组3天38 耳中8耳出现听力阂值升高，范围在10 dB左右，部分阈值无升高耳各波潜伏期 及I一ⅡI波波间期也有延长。2周36耳中有13耳出现听力阈值升高，听损率为 36．11％，范围在10 dB．30 dB之间。 2．扫描电镜观察结果 I组和Ⅱ组的内毛细胞和外毛细胞昕毛排列整齐， 无缺失：III组3天时第三排外毛细胞部分听毛缺失和倒伏，第一、二排不明显： III组2周时第三排外毛细胞听毛出现倒伏、部分听毛呈簇状缺失或完全缺失，第 一和第二排外毛细胞听毛有轻微的倒伏，无缺失现象。 3．免疫组织化学结果 I组和II组耳蜗组织ICAM．1表达为阴性：III组螺 旋神经节细胞、神经纤维、血管纹、基底膜和血管内皮细胞等部位均有ICAM．1 2 郑州人学2004年硕士研究生毕业论文 郑州人学2004年硕士研究生毕业论文 鸡JI型胶腺建立豚鼠自身免疫性内耳病的实验