核酸提取方法的进展[兼容模式].pdfVIP

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2019-04-30 发布于湖北
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核酸提取方法的进展[兼容模式].pdf

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核酸提取方法的进展 ——从经典方法到硅膜吸附法、硅胶磁珠分离法 ——从手工提取到自动化提取凯杰生物陈永亮 - 1 - Sample Assay Technologies 核酸提取方法的分类：按照提取原理分：经典方法有煮沸裂解法、酚-氯仿提取法，新方法有硅膜吸附法、磁珠分离法等按照提取方式分：手工提取和自动化提取 - 2 - Sample Assay Technologies 核酸纯化方法的发展 1953 1993 DNA structure Purification of DNA with Phenol Chloroform QIAGEN introduces the determined ultracentrifuge Extractions spin column published DNA结构被发现超高速离心法提取DNA 酚-氯仿提取法凯杰引入硅胶膜柱技术 - 3 - Sample Assay Technologies 经典手工提取方法：煮沸裂解法：一般用于DNA的手工提取，分为一步法和两步法，一步法得到的DNA含有较多小分子抑制物。两步法是第一步在样本中加入沉淀剂后离心弃上清，以去除小分子抑制物并沉淀病毒颗粒；第二步加入裂解液后煮沸，以释放DNA 及沉淀残留蛋白等大分子抑制物，离心取上清即为得到的 DNA。酚-氯仿提取法：一般用于RNA的手工提取，先在样本中加入裂解液，再加入氯仿后离心，以释放RNA并使之与蛋白分离，再将上清液加入到异丙醇中以萃取RNA，离心后弃上清，加入乙醇洗涤后即为得到的RNA。 - 4 - Sample Assay Technologies 核酸提取的新方法 QIAGEN Solutions （凯杰的解决方案）硅胶膜法硅胶磁珠法 - 5 - Sample Assay Technologies 离液盐的作用变性蛋白和核酸改变水的结构，帮助核酸结合到硅胶膜上溶解多聚糖胶 - 6 - Sample Assay Technologies Carrier RNA的作用确保对低滴度病毒RNA 的回收效率保护病毒RNA ，降低其被RNase 的概率减少管壁对病毒RNA 的吸附 - 7 - Sample Assay Technologies 二氧化硅分离核酸水分子 DNA - 8 - Sample Assay Technologies 二氧化硅分离核酸