大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的诱导-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2018,51(6):1067-1078 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2018.06.006 大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的 诱导免疫作用及机制 张一豪，冯鸿杰，袁媛，靳羽莹，师勇强，张朝军，李付广 （中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室，河南安阳 455000 ） Verticillium dahliae ）弱致病力菌株 Vd171 对棉花黄萎病的诱导免疫效 摘要：【目的】明确大丽轮枝菌（ 果及作用机制, 为探索棉花黄萎病生物防治新途径提供依据。【方法】以大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171为研究对 象，温室苗期评估不同接种方法、接种时期、接种次数及接种体类型的诱导免疫效果；不同接种方法包括蘸根、 灌根、茎部针刺、叶面喷雾和浸种，均采用 Vd171 分生孢子悬浮液（1×107 个分生孢子/mL），蘸根、灌根和叶面 喷雾为每钵10 mL，茎部针刺为每株0.2 mL，浸种时间为12 h；不同接种时期试验设置接种棉花黄萎病菌强致病 力菌株Vd080 前2、4、6、8 d及之后的1、2、4 d接种Vd171共7个处理；接种次数试验设置接种Vd080前接种 Vd171 一次和两次；接种体类型采用 Vd171 的分生孢子悬浮液和查氏培养滤液。采用水培方法培育棉苗，先接种 Vd171，4 d后接种Vd080 ，不同时间取根组织，振荡冲洗Vd080 分生孢子，显微镜下计数，测定弱致病力菌株 GFP GFP 免疫后病原菌在棉苗根部的定殖量；接种Vd080GFP 后第7天，PDA平板上分离棉苗下胚轴切段，检测病原菌在植株 体内的扩展速度。取接种Vd171后不同时段的棉苗，采用qPCR方法检测植株内防御相关酶基因 4CL、CHI、POD、 PPO 和 PAL 的表达量；测定 POD、PPO、PAL 和 CHI 的活性变化。将棉苗茎部做切片，用间苯三酚染色，显微镜下 观察茎部维管束木质化情况；将棉苗叶片用DAB染色，观察叶片活性氧爆发情况。【结果】在接种大丽轮枝菌强致 病力菌株Vd080前4 d接种Vd171，棉株的免疫效果最好，防治效果达到89.4%；几种接种方法相比较，以蘸根防 治效果最好，为70.0%，其次是叶面喷雾，为54.3%，浸种和灌根分别为45.0%和39.0%，而针刺效果最差，为2.2%； 接种Vd171一次和两次对棉株均具有较好的免疫效果，其防治效果分别为85.6%和81.4%；先接种分生孢子、培养 滤液对棉株均具有较好的免疫效果，其防治效果分别为85.6%和81.1%；先接种Vd171能阻止Vd080在棉花根部的 定殖和在植株体内的扩展；Vd171能显著诱导棉苗防御相关基因 PAL、4CL 和 CHI 的表达，其中，GhPAL、Gh4CL 和 GhCHI 变化最大，分别为对照处理的2.2、8.5和2.6倍，均显著或极显著高于对照；经Vd171诱导的棉苗下胚轴 中 PPO、PAL、POD 和 CHI 酶活性均极显著高于对照，分别较对照提高 31.9%、131.0%、57.1%和 102.1%，子叶中 PAL、CHI和POD酶活性也显著高于对照，分别较对照提高22.1%、39.6%和7.1%，PPO酶活性与对照无显著差异； 先接种Vd171 诱导了细胞木质化和活性氧的爆发。【结论】大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171可以有效地诱导棉花对 黄萎病产生抗性，在棉花黄萎病防治上具有较好的应用前景。 关键词：棉花; 黄萎病；大丽轮枝菌；弱致病力菌株；诱导免疫 Induced Immunity Effect and Mechanism of the Weak Pathogenicity Isolate of Verticillium dahliae Vd171 A