同位素标记技术在分子生物学实验技术中的应用课件.pptVIP

Maxam-Gilbert法所用的化学修饰技术 碱基 特异修饰方法 G 在pH8.0下，用硫酸二甲酯对N7进行甲基化，使C8－C9键对碱裂解具有特异的敏感性 A+G 在pH2.0下，哌啶甲酸可以使嘌呤环的N原子质子化，从而导致脱嘌呤，并因此削弱腺嘌呤和鸟嘌呤的糖苷键 C+T 肼可打开嘧啶环，后者重新环化成五元环后易于除去 C 在1.5mol/LNaCl存在下，只有胞嘧啶可同肼发生明显可见的反应 A+C 在90℃下，用1.2mol/LNaOH处理，可使A位点发生剧烈的断裂反应，而C位点的断裂反应较微弱 DNA序列分析 DNA序列分析自动化 用四甲基若丹明(Tetramethylrhodamine)作为荧光剂标记DNA引物，带有这种引物的DNA片段能在激光诱导下发出荧光。按照标准的双脱氧终止法或化学终止法进行测序反应，跑DNA凝胶后用计算机检测。 荧光标记物 ddGTP ddATP ddTTP ddCTP 单泳道电泳及信号收集 正极 负极 计算机排序 5ˊ GS FLX系统超高通量测序技术原理 GS FLX系统的测序原理和GS 20一样，也是一种依靠生物发光进行DNA序列分析的新技术：在DNA聚合酶，ATP硫酸化酶，荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号释放偶联起来 (图 1)。通过检测荧光信号释放的有无和强度，就可以达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针，也不需要进行电泳；具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。  虹吸印迹 分子杂交炉 杂交过程 成像观测 放射性自显影 利用标记核素自身的放射性射线使感光材料感光成象的过程。目前常用的方法有: 传统的胶片自显影 感光屏：医用X光片；原理：爆光过程，射线粒子使X光片乳胶基质中均匀分布的溴化银晶粒感光形成物点的潜影，然后经显影及定影得像图。胶片影象可在底片上直接观察。 X光自显影暗盒及图像增强屏 成像观测 储存磷光屏（storage phosphor screen） 一种由磷光晶体制成的影像屏（Imaging Plate)。经射线爆光后IP以潜能储存射线能，当在读取装置下扫描读取时， IP在扫描激光下释放潜能发出蓝绿光，光强与爆光时射线强度成正比，用光电传感器转换电信号，再经模数转换成二进制编码信号，由计算机成象系统合成为影象图。 操作：用塑料薄膜盖电泳凝胶，贴附于装于暗盒的磷光屏曝光，然后在成像仪上，通过扫描磷光屏上储存的光能进行成象。 UVI化学发光凝胶成像系统 与著名的Molecular DynamicsTM PhosphorImagerTM 系统是一样，台风储磷技术---磷屏Typhoon9000系列能对所有电离辐射源提供高分辨率图像并精确定量：??????????3H??????????????32P??????????14C??????????? 33P??????????125I?????????? 35S??????????18F?????????????99mTc大成像面积，高分辩光学系统和灵敏的磷屏组合，为您提供可靠的实验结果。下图给出的是用32P标记的AtlasTM 微阵列(macroarray)在GP屏上的图像。 成像观测 闪烁光纤屏 由塑料光纤制成的板，光纤中填有铅和发光染料，使射线能转换为可见光光子，然后再由电荷耦合器件CCD摄像机成像。较胶片和磷光屏的分辨率好，近实时成像且需曝光量低。 成像观测 放射性薄层扫描仪 由空间位置灵敏探测器组成核探测仪器。可用于薄层层析板、凝胶电泳转印膜上放射性条带的直接定位测定。 美国的Bioscan公司 ?AR-2000图像扫描仪 AR2000图像扫描仪可对所有类型同位素（包括3H）标记的TLC板、凝胶、印迹进行直接定位定量计数测量。扫描仪采用充气式计数器，可检测γ和β射线的同位素。对整块薄层层析条带的扫描可在1分钟内完成。整套系统包括一个仪器控制和数据采集软件，扫描结果以层析图或2D图像显示，自动完成对峰的定量，并以多种方式显示结果。·应用于TLC板、凝胶和印迹·不需破坏TLC板即可进行定量·对所有类型同位素（包括3H）灵敏·简单易用的WinScan软件·快速、自动、可靠的运行·提供出色的空间分辨率·针对1、2、3块TLC板可选择不同的型号·2-D彩色图像?·主要应用于放射化学纯度、脂类生物化学、代谢研究、酶分析、毒理学研究等领域。 瑞士卡玛 产地：德国 同位素薄层扫描仪 技术参数扫描面积为 400×200