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单宁酶开题报告(共10篇) 　　篇一：单宁酶　　摘要　　单宁酶是一种水解酶，能水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚酸键，生成没食子酸和其他化合物。在酶制剂工业发达的国家，如日本、美国，单宁酶的基础理论和应用研究工作开展得较早，并已在茶饮业中取得了较好的经济效益。随着国民经济的不断发展，人们生活水平的不断提高，单宁酶得到了更广泛的应用。人们已在皮革业、饲料业、化妆品业等方面开发了单宁酶的多种用途。中国是个茶叶大国，而且可开发资源丰富，单宁酶的应用前景十分广阔。单宁酶的性质　　国外对单宁酶性质的研究相对较多，也较深入，为今后的应用研究提供了有价值的参考。单宁酶的酶学性质　　来源于不同菌种的单宁酶动力学性质稍有区别。yamadah.等报道的黄曲霉单宁酶活性稳定ph值范围最窄，为5.0～5.5另据韩国的chaesoo-kyu等报道的曲霉菌种an-11单宁酶活性稳定的ph值为5.0～6.5其他菌种单宁酶活性稳定ph范围大都在～之间，最适ph值为4～6，热稳定范围在70～80℃以下，最适反应温度为35～60℃。日本科学家hdeaki-4yamada等就底物浓度对黄曲霉的影响进行了研究，测出km(以单宁为底物)为×10-4mol/l;km(以葡萄糖212没食子酸为底物)为×10mol/l；km(以没食子酸甲酯为底物)　　-4为×10mol/l。经6mol/l盐酸胍处理后，单宁酶将发生不可逆失活，各种金属离子以及　　edta对酶活性影响报道结论不一。　　单宁酶的物理化学性质　　纯单宁酶在紫外光区280nm处，有一个最大吸收峰，在浓度为10%，比色皿为1cm×1cm条件下，吸光系数a为，260nm处吸光度与280nm处吸光度之比为0.51。　　sadaakiiibuchi，chaesoo-kyu分别用凝胶过滤法测定出它们各自选育的菌种单宁酶相对分子质量都为XX00。osaoadachi等分别用沉降法和电泳法测定黄曲霉单宁酶相对分子质量，分别是和19XX。chantal等测出黑曲霉lcf8单宁酶相对分子质量为，其等电点在4左右。chantal和chaesoo-kyu在对各自提纯的酶进行sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析时发现，单宁酶分子由2种亚基组成，但这个结果与kengiaoki对酵母单宁酶结构分析的结果有所不同。后者用同样的方法，只得到一条电泳蛋白带。　　osaoadachi等进一步研究了黄曲霉单宁酶的其他结构特性，其分子中氮含量为%(凯氏定氮法)，用二硝基氟苯法测氨基末端，有2个dnp-氨基酸产物，分别为dnp-丙氨酸与dnp-精氨酸,这一结果进一步指明黄曲霉单宁酶为2种亚基组成。单宁酶另一重要特征是，它为一种糖蛋白，而不同来源的单宁酶糖含量有差异。例如，黄曲霉单宁酶糖基占总相对分子质量的25%，糖基为甘露糖。chantal从黑曲霉中提取的单宁酶，其糖基含量高达43%，而酵母单宁酶糖基含量为62%。parthasarathyn.等探明其选育的黑曲霉单宁酶碳水化合物为葡萄糖和甘露糖，肽链通过丝氨酸和苏氨酸与糖基相连接。糖基与酶的功能关系还未见报道。单宁酶的催化性质　　saddakiiibuchi等对米曲霉单宁酶的催化途径、底物的专一性和阻遏作用进行了研究。结果表明，单宁酶催化葡萄糖酸酯，水解成没食子酸与葡萄糖。中间产物为1，2，3，4，6-黄酰单宁和2，3,4，6-四酰单宁以及两种没食子酸葡萄糖。反应途径如下所示：　　单宁酶只能水解没食子酸化合物中的酯键，不对底物类似物如甲基间二羟甲酸盐起作用。酶对底物是否有催化作用决定于es复合物的形成。es复合物形成条件有3点：a.只要是没食子酸形成的酯,对醇没有限制；b.酚羟基在苯环上相对位置不同，将影响其与酶的结合作用；c.形成的es复合物中酚羟基形成的酯键可被水解，而其他酯键或羧基由于没有直接与酶结合，　　不能发生以上的反应。酶反应受到含酚羧基的底物类似物的竞争性抑制，但2,6--二羟基苯甲酸是非竞争性抑制。这表明尽管底物与酶结合的复合物都是没食子酸化合物，但因酶与底物结合位点不同，它对某些酚羟基底物起作用，而对另一些底物类似物又不起作用。单宁酶的来源　　单宁酶主要来源于微生物，菌种主要为曲霉菌。另外，青霉、酵母、细菌、植物也有产单宁酶的报道，国外资料报道的各种产酶菌种列于表1.这些菌种都是以单宁作为诱导物来产生单宁酶的，充分证明单宁酶为一种诱导酶。doiseniji等从基因表达调控方面对菌种产生单宁酶进行了探索,证明指导单宁酶生物合成的mrna极不稳定,而放线菌酮可迅速阻止单宁酶的产生。　　单宁酶的提取与纯化　　单宁酶的提纯技术随着蛋白质提纯技术的进步而不断提高。在分离纯化此酶的过程中，主要困难表现在破壁取酶。曲霉单宁酶为胞内酶，它分布于真菌的细胞壁与细胞膜之间，结合得非